Amplisens hcv fl

Symptomen

Van de hitte in de lisses, parken en tuinen zijn de toetsen actief. Tom perebuvayuchi over de natuur, varto poturbuvatsya over vslnu bepeke, abi.

2017/03/01

AmniSure-test

U kunt ook een test kopen voor het bepalen van de lekkage van vruchtwater van zwangere Amnyshur in apotheken in Kiev:
1. Apotheek "Arnica".

2016/08/26

FLOROTSENOZ

Een uitgebreide test van de nieuwe generatie voor de diagnose van ALLE klinisch significante infecties van het urogenitale kanaal bij vrouwen in de reproductieve leeftijd..

INSTRUCTIES. "AmpliSense HCV-genotype-FL" AmpliSense

afschrift

1 INSTRUCTIES voor het gebruik van een reagenskit voor het detecteren en differentiëren van de hepatitis C-virus (HCV) genotypen in klinisch materiaal door de methode van polymerasekettingreactie (PCR) met real-time hybridisatie-fluorescentiedetectie AmpliSense HCV genotype-FL AmpliSense Federale begrotingsinstelling of Science "Central Research Institute of Epidemiology", Russische Federatie,, Moskou, Novogireevskaya street, 3a

2 INHOUD LIJST VAN AFKORTINGEN. 3 DOEL. 3 PRINCIPE VAN DE METHODE. 3 FORMATEN EN VORMEN VAN UITGIFTE VAN REAGENSKIT. 5 ANALYTISCHE KENMERKEN. 5 VOORZORGSMAATREGELEN. 6 AANVULLENDE MATERIALEN EN UITRUSTING. 7 VERBINDING, TRANSPORT EN OPSLAG VAN HET ONDERZOCHTE MATERIAAL. 9 FRT FORMAT SAMENSTELLING GELEID PCR-ONDERZOEK RNA EXTRACTIE VAN ONDERZOEKS MONSTERS GELEID REVERSE TRANSCRIPTIE REACTIE A. Bereid buizen voor reverse transcrip- ties. Bereiding van amplificatiebuizen met behulp van de PCR kit kit kit FRT-G A2. Bereiding van buizen voor amplificatie met behulp van de PCR-kit reagenskit (optie FRT-G) B. Versterking van amplificatie met detectiesystemen in real-time modus ANALYSE EN INTERPRETATIE VAN DE RESULTATEN VAN GELDIGHEIDS-, TRANSPORT- EN OPSLAGVERBINDINGEN RIBO-Sorb "APPENDIX 2. RNA-EXTRACTIE MET BEHULP VAN DE REIBENT-SET VAN" RIBO-prep "SYMBOLEN GEBRUIKT IN PRINT PRODUCT x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 2 van 32

3 LIJST VAN AFKORTINGEN In deze instructie worden de volgende afkortingen en notaties gebruikt: DNA deoxyrubonucleïnezuur cdna complementaire DNA RNA ribonucleïnezuur VAN reverse transcriptie EKR interne controlemonster JCE negatieve controlemonster OCR positieve controlemonster K + - positieve controle PCR K - negatieve controle PCR OK - negatief extractiecontrole PCR-polymerasekettingreactie FBUN Centraal Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie Rospotrebnadzor HCV FRT BENOEMING Federale begrotingsinstelling "Centraal Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie" van de Federale Dienst voor Toezicht op de bescherming van consumentenrechten en menselijk welzijn Hepatitis C-virus Fluorescerende Detectie in "Realtime" AmpliSense HCV Genotype-FL Reagentiekit is ontworpen om genotypen van het virus te identificeren en te differentiëren hepatitis C (HCV) in klinisch materiaal door de methode van polymerasekettingreactie (PCR) met hybridisatie-fluorescentiedetectie in de "real time" -modus. De bepaling van HCV-genotypes la, lb, 2, 3a, 4 wordt uitgevoerd met behulp van de "PCR-kit" -variant FRT-gl-4; HCVa la, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6 genotypes worden bepaald met behulp van de "PCR kit" -variant FRT-g1-6. Deze reagenskit wordt aanbevolen voor gebruik na detectie van HCV-RNA in de onderzochte monsters met reagenskits die zijn ontworpen voor zowel kwalitatieve als kwantitatieve bepaling van hepatitis C-virus-RNA (bijvoorbeeld AmpliSense HCV-FL, met behulp van hybridisatie fluorescentiedetectie of AmpliSense HCV- EPh "met behulp van elektroforetische detectie van amplificatieproducten (vervaardigd door FBUN TsNII Epidemiology Rospotrebnadzor)). WAARSCHUWING! De resultaten van PCR-onderzoeken zijn meegenomen in de complexe diagnose van de ziekte. 1. PRINCIPE VAN DE METHODE 1 Conform richtlijn 98/79 / EG van de Europese Unie. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 3 van 32

4 Het principe van testen is gebaseerd op de extractie van RNA uit bloedplasma samen met een recombinant intern controlemonster (ASD), waarbij een reverse transcriptiereactie van RNA en PCR-amplificatie van cdna met hybridisatie-fluorescentiedetectie in "real time" wordt uitgevoerd. Om fout-negatieve resultaten uit te sluiten, werd VKO geïntroduceerd in de studie, die het mogelijk maakt om alle stadia van de analyse te controleren en het effect van PCR-remmers op de resultaten van de studie te evalueren. De bepaling van het HCV-genotype van één monster wordt uitgevoerd in verschillende reageerbuisjes, in elke reageerbuis worden twee HCV-genotypen of één HCV- en VKO-genotypes onderscheiden. De kit is ontworpen voor instrumenten met twee of meer fluorescentiedetectiekanalen. De tabel toont de kanalen waarmee HCV-genotypen worden gedetecteerd voor elk reactiemengsel. Reactiemengsel 1b / 3a 1a / 2 BKO / 4 5a / 6 2 Kanaal Detecteerbare HCV-genotypen FAM / groen 1b 1a CTP 5а JOE / HEX / Geel / Cy3 3a De FRT-g1-6-versie is opgenomen in de PCR-kit. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 4 van 32

5 FORMATEN EN VORMEN VAN GETOONDE REAGENSKITS De reagenskit is beschikbaar in 1 formaat: FRT-formaat De reagenskit is beschikbaar in 7 configuratiekits: Formulier 1 omvat de RIBO-sorb-reagenskitoptie 50, de REVERTA-L-optie 50, de PCR-kit FRT-g1-4-variant. Formulier 2 omvat de "RIBO-prep" reagenskits optie 50, "REVERT-L" optie 50, "PCR-kit" optie FRT-g1-4. Vorm 3 omvat de optie "PCR kit" reagens kit FRT-g1-4. Vorm 4 omvat de "RIBO-sorb" reagenskits, optie 50, "REVERT-L", optie 50, "PCR-kit" optie FRT-g1-6. Formulier 5 bevat de "RIBO-prep" reagenskits optie 50, "REVERT-L" optie 50, "PCR-kit" optie FRT-g1-6. Vorm 6 bevat de optie "PCR kit" reagenskit FRT-g1-6. Vorm 7 omvat bulkreagenskits, verpakt in afzonderlijke reagentia, met labeling van reagentia op hun bulkverpakking. Voltooiingsvormen 1, 2, 3 zijn ontworpen om de genotypes la, lb, 2, 3a, 4 van het hepatitis C-virus te bepalen Voltooiingsvormen 4, 5, 6 zijn bedoeld om de genotypes la, lb, 2, 3a, 4, 5a, 6 van het hepatitisvirus te bepalen C. Voltooiingsvormen 1, 2, 4, 5 zijn ontworpen voor complete PCR-onderzoeken, waaronder extractie van RNA uit klinisch materiaal, reverse transcriptie van RNA en PCR-amplificatie van cdna met hybridisatie-fluorescentiedetectie in "real time". Vormen van bundeling 3 en 6 zijn bedoeld voor het uitvoeren van PCR-amplificatie van cdna met hybridisatie-fluorescentiedetectie in de "real-time" modus. Om een ​​complete PCR-studie uit te voeren, is het noodzakelijk om de reagenskits te gebruiken die door het Research Institute of Epidemiology van Rospotrebnadzor zijn geproduceerd voor de extractie van RNA (reagenskits "RIBO sorb" of "RIBO-prep") en de reverse transcriptiereactie (REVERTA-L-reagenskit) uit te voeren. De vorm van een complete set 7 is bedoeld voor productiedoeleinden voor de daaropvolgende markering in de taal van de klant en een complete set op sets. WAARSCHUWING! Het gebruik van de formulenset 7 wordt alleen gemaakt in overeenstemming met de voorschriften goedgekeurd door FBUN Centraal Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie van Rospotrebnadzor. ANALYTISCHE KENMERKEN 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 5 van 32

6 Analytische gevoeligheid Extractievolume, μl RNA / DNA-extractiekit 100 "RIBO-sorb" 100 "RIBO-prep" Amplificatie- en detectiekit "PCR kit" versie FRT-g1-4, "PCR kit" optie FRT- g1-6 "PCR kit" versie FRT-g1-4, "PCR kit" versie FRT-g1-6 Analytische gevoeligheid, IE / ml 2,5x10 3 5x10 3 Analytische specificiteit Een beoordeling van de analytische specificiteit van de reagenskit vertoonde geen kruisreacties tussen genotypes 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a en 6 van het hepatitis C-virus met behulp van sterk geconcentreerde recombinanten de covariante positieve controlemonsters en bloedplasma monsters overeenkomstig HCV genotypen. VOORZORGSMAATREGELEN Het werk moet worden uitgevoerd in een laboratorium dat moleculair biologische (PCR) klinische materiaalstudies uitvoert voor de aanwezigheid van pathogene ziekteverwekkers, volgens de sanitaire en epidemische regels van de joint venture "Veiligheid van het werk met micro-organismen van de III IV-pathogeniteit (gevaar) en pathogenen van parasitaire ziekten", SanPiN "Sanitair -epidemiologische vereisten voor de behandeling van medisch afval "en richtlijnen MU" Organisatie van laboratoria met behulp van amplificatiemethoden n kleinovyh zuren bij het werken met materiaal dat micro-organismen pathogeniteit groepen I IV". Voldoe tijdens het werken altijd aan de volgende vereisten: - De geteste monsters moeten worden beschouwd als infectieus, werk en opslag organiseren in overeenstemming met de joint venture "Veiligheid van werk met micro-organismen van de III IV pathogeniteit (gevaar) groepen en pathogenen van parasitaire ziekten." - Gemorste monsters of reagentia opruimen en desinfecteren met behulp van ontsmettingsmiddelen in overeenstemming met de joint venture "Veiligheid van werk met micro-organismen van de III IV pathogeniteit (gevaar) groepen en pathogenen van parasitaire ziekten". - Het laboratoriumproces moet unidirectioneel zijn. De analyse wordt uitgevoerd in 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 6 van 32

7 afzonderlijke kamers (zones). Het werk zou moeten beginnen in de selectiezone, verdergaan in de versterkings- en detectiezone. Breng geen monsters, apparatuur en reagentia terug in het gebied waar de vorige fase van het proces werd uitgevoerd. - Verwijder ongebruikte reagentia in overeenstemming met SanPiN "Sanitair-epidemiologische vereisten voor het beheer van medisch afval." WAARSCHUWING! Wanneer het afval na amplificatie wordt verwijderd (buizen die PCR-producten bevatten), is het onaanvaardbaar om de buizen te openen en de inhoud te besprenkelen, omdat dit kan leiden tot contaminatie van het laboratoriumgebied, apparatuur en reagentia met PCR-producten. Gebruik de kit uitsluitend voor het beoogde doel, volgens deze handleiding. Sta alleen speciaal opgeleid personeel toe om met de kit te werken. Gebruik de kit niet na de vervaldatum. Gebruik wegwerphandschoenen, laboratoriumjassen, bescherm de ogen tijdens het werken met monsters en reagentia. Na het werk uw handen grondig wassen. Vermijd contact met huid, ogen en slijmvliezen. Bij contact, spoel het getroffen gebied onmiddellijk met water en zoek medische hulp. Veiligheidsinformatiebladen (veiligheidsinformatieblad MSDS-materiaal) zijn op aanvraag verkrijgbaar. AANVULLENDE MATERIALEN EN UITRUSTINGSZONE 1. Extractie van RNA uit klinisch materiaal 1. Reagenskits voor RNA / DNA-isolatie "Ribo-sorb" (TU), "RIBO prep" (TU) of andere aanbevolen door FBUN Centraal Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie van Rospotrebnadzor voor het werken met de complete set 3, Laminaire doos. 3. Vortex. 4. Microcentrifuge voor Eppendorf-buisjes tot 12 duizend g. 5. Thermostaat voor Eppendorf-buisjes van 25 tot 100 C. 6. Automatische dispensers met variabel volume (van 5 tot 50 μl, van 20 tot 200 μl en van 100 tot 1000 μl). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 7 van 32

8 7. Disposable polypropyleen vastgeschroefde of goed sluitende buizen van 1,5 ml. 8. Wegwerptips met filter tot 100 μl, tot 200 μl en tot 1000 μl in statieven. 9. Vacuüm medische aspirator met een kolfval om de supernatant te verwijderen. 10. Wegwerptips tot 200 μl per statief. 11. Statieven voor buizen van 1,5 ml. 12. Koelkast van 2 tot 8 С 13. Aparte kamerjas, hoeden, schoenen en wegwerphandschoenen volgens MU Capaciteit met desinfecterende oplossing. GEBIED 2. Uitvoering van de reverse transcriptiereactie en amplificatie in "real time" 1 Sets van reagentia voor het uitvoeren van reverse transcriptiereactie "Reverte-L» (W) tijdens bedrijf vormt een volledige 3, dozen abacterial luchtomgeving (PCR-box). 3. Centrifuge / Vortex. 4. Automatische dispensers met variabel volume (van 5 tot 50 μl en van 20 tot 200 μl). 5. Wegwerptips met filter tot 100 μl en tot 200 μl in statieven. 6. Statieven voor buizen van 0,5 ml of 0,2 ml of 0,1 ml (afhankelijk van het gebruikte type buis). 7. Koelkast van 2 tot 8 С met vriezer niet hoger dan min 16 С. 8. Aparte kamerjas, hoeden, schoenen en wegwerphandschoenen volgens MU Capaciteit voor het afvoeren van tips. Bij het uitvoeren van een reverse transcriptiereactie met behulp van "REVERET-L": 10. Disposable polypropyleenbuizen met een volume van 0,2 ml of 0,5 ml (afhankelijk van het gebruikte model thermostaat of versterker, waarin de reactie van reverse transcriptie wordt uitgevoerd). 11. Thermostaat voor buizen zoals "Eppendorf" 25-100 C of een programmeerbare thermische cycler (bijvoorbeeld "Tertsik" ( "DNA Technology", Rusland), Gradiënttijd Palm Cycler (Corbett Research, Australië), GeneAmp PCR System 2700 (Applied Biosystems, USA)). 12. Bij het opzetten van de reverse transcriptiereactie voor minder dan 10 studeerde 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / blz. 8 van 32

9 monsters automatische dispenser met variabel volume (van 0,5 tot 10 μl). 13. Bij het opstellen van de reverse transcriptiereactie voor minder dan 10 onderzochte monsters, wegwerptips met een filter tot 10 μl per statief. Bij gebruik van de "PCR-kit": 14. Programmeerbare roterende versterkers (bijvoorbeeld Rotor-Gene 3000 of 6000 (Corbett Research, Australië), Rotor-Gene Q (Qiagen, Duitsland)) of versterkers van het tablettype (bijvoorbeeld icycler) IQ5 (Bio-Rad, USA)), of amplificeerbare SmartCycler II (Cepheid, USA), of Mx3000P, Mx3005P (Stratagene, USA) en de aanbevolen FBUN Research Instituut voor Epidemiologie in de richtlijnen voor het gebruik van dit reagens kit). 15. Disposable polypropyleenbuizen voor PCR: a) dunwandige buizen voor PCR met een volume van 0,2 ml met een convexe dop (niet-gerekt of gestript) bij gebruik van een tabletachtige inrichting; b) dunwandige PCR-buizen van 0,2 ml met een platte dop (niet-gespannen) of stripbuizen met een volume van 0,1 ml met behulp van een inrichting van het roterende type. c) 0,025 ml PCR-buizen (Cepheid, VS) met behulp van een SmartCycler II-instrument (Cepheid, VS). 16. Gelabeld statief (bij gebruik van apparaten van het tablet-type). 17. Disposable polypropyleenbuizen voor PCR (platte dop, niet-standaard) voor 0,5 ml 18. Centrifuge en reageerbuisrek (Cepheid, VS) met SmartCycler II (Cepheid, VS). Sample inzameling, het transport en de opslag van het testmateriaal voor de aanvang van de werkzaamheden moet vertrouwd zijn met de richtlijnen van zijn 'te nemen, het transport, de opslag van klinisch materiaal voor PTsRdiagnostiki "ontwikkeld door FSIS CRIE Rospotrebnadzor, Moskou, 2008 Voor de PCR-studies met behulp van perifere bloed plasma. Om plasma te verkrijgen wordt bloed in een reageerbuis met een 3% EDTA-oplossing in een hoeveelheid van 20: 1 (20 delen bloed per 1 deel EDTA) opgenomen. Draai de gesloten reageerbuis meerdere keren met bloed. Binnen 6 uur na het moment van bloedafname moet plasma worden verzameld en naar een nieuwe buis worden overgebracht. Om dit te doen, wordt de buis met bloed 20 min gecentrifugeerd bij g, waarna het plasma wordt genomen en overgebracht naar een afzonderlijke wegwerpbare 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 9 van 32

10 reageerbuis. Plasma kan niet langer dan 3 dagen worden bewaard bij een temperatuur van 2 tot 8 ° C en gedurende lange tijd bij een temperatuur die niet hoger is dan minus 68 C. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / blz. 10 van de 32

11 FRT FORMAT FRT FORMAT SAMENSTELLING De RIBO-Sorb reagens kit versie 50 reagens kit voor de isolatie van RNA / DNA uit klinisch materiaal omvat: Reagens Beschrijving Volume, ml Aantal Lysis oplossing Oplossing voor wassen 1 Oplossing voor wassen 3 Oplossing voor wassen, 5 1 flacon flacon 50 1 flacon 20 1 flacon Sorbens Witte suspensie 1,25 1 tube RNA-buffer 0,5 5 tubes De reagenskit is ontworpen om RNA / DNA te isoleren uit 50 monsters, inclusief controles. Inbegrepen in de samenstelling van de complete set 1 en 4. Reibent kit "RIBO-prep" versie 50 reagenskit voor de isolatie van RNA / DNA uit klinisch materiaal omvat: Reagens Beschrijving Volume, ml Hoeveelheid Oplossing voor lysis Oplossing voor precipitatie Oplossing voor wassen 3 Oplossing voor wassen 4 RNA-buffer Transparant blauw gekleurd flesje 20 1 flacon 25 1 flacon 10 1 flacon 1,2 4 tubes De reagenskit is ontworpen voor RNA / DNA-isolatie van 50 monsters, inclusief controles. Inbegrepen in de vorm van picking 2 en 5. Optionele reagensset voor revers-L-reagens 50 voor 3 Bij opslag van een lyserende oplossing, een lysisoplossing en een wasoplossing 1 bij een temperatuur van 2 tot 8 ° C, kan zich een neerslag vormen in de vorm van kristallen. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 11 van 32

12 FRT-FORMAT voor cdna-productie op een RNA-sjabloon omvat: RT-G-mix-1 RT-mix Revertase (MMlv) DNA-buffer Reagens Beschrijving Hoeveelheid, ml Hoeveelheid 0,01 5 buizen 0,125 5 buizen 0,03 1 buis 1, 2 1 tube De versie 50 van de reagenskit is ontworpen voor het uitvoeren van 60 reverse transcriptiereacties, inclusief controles. Reagentiakit "PCR kit" variant FRT-G1-4 reagens kit voor PCR amplificatie van cDNA genotypen (1a, 1b, 2, 3a, 4) met HCV gibridizatsionnofluorestsentnoy detectie in "real time" omvat: PCR-mengsel-1- FRT HCV genotypen 1b / 3a PCR mix-1-FRT HCV genotypen 1a / 2 PCR mix-1-FRT HCV EKR / 4-genotype reagens Beschrijving volume ml Aantal RT-PCR-mengsel-2-FEP / FRT polymerase (TaqF) HCV cdna PKO-genotypes 1b / 3a HCV cdna PKO-genotypes 1a / 2 PKO cdna HCV CTP / genotype 4 TE-buffer 0,6 1 buis 0,6 1 buis 0,6 1 buis 0,3 3 buis 0,03 3 reageerbuizen 0.2 1 reageerbuis 0.2 1 reageerbuis 0.2 1 reageerbuis 0.5 1 reageerbuis K De reagenskit is ontworpen voor 55 tests (165 amplificatiereacties), inclusief controles. Inbegrepen in de set configuraties 1, 2 en 3. De selectiemonsters zijn bevestigd aan de reagenskit: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 12 van 32

13 FRT-FORMAAT Reagensbeschrijving Hoeveelheid, ml Hoeveelheid OKO VKO STI-248-rec 0,5 1 buis 0,5 1 buis Testkit "PCR-kit" versie FRT-g1-6 kit voor PCR-amplificatie van cdna-genotypen ( 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6) HCV met real-time hybridisatie-fluorescentiedetectie omvat: Reagens Beschrijving Volume, ml Hoeveelheid PCR-mix-1-FRT HCV-genotypes 1b / 3a PCR-mix- 1-FRT HCV-genotypes 1 a / 2 PCR-mix-1-FRT HCV VKO / genotype 4 PCR-mix-1-FRT HCV-genotypen 5a / 6 OT-PCR-mix-2-FEP / FRT-polymerase (TaqF) PKO cdna HCV genotypes 1b / 3a PKO cdna HCV-genotypes 1a / 2 PKO cdna HCV EKO / genotype 4 PKO cdn HCV-genotypes 5a / 6 TE-buffer 0,6 1 reageerbuis 0,6 1 reageerbuis 0,6 1 reageerbuis 0,6 1 reageerbuis 0,3 4 reageerbuizen 0,03 4 reageerbuizen 0,2 1 reageerbuis 0,2 1 reageerbuis 0, 2 1 tube 0,2 1 tube 0,5 1 tube De reagenskit is ontworpen voor 55 tests (220 amplificatiereacties), inclusief controles. Inbegrepen in de set van configuratie 4, 5 en 6. Aan de reagenskit bevestigde controlemonsters van de selectiefase: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 13 van 32

14 FRT-FORMAAT Reagensbeschrijving Hoeveelheid, ml Hoeveelheid OKO VKO STI-248-rec 0,5 1 reageerbuis 0,5 1 reageerbuis HET PCR-ONDERZOEK UITVOEREN Het PCR-onderzoek bestaat uit de volgende stappen: Extractie van het RNA uit de onderzochte monsters. Uitvoeren van reverse transcriptiereactie. Amplificatie met hybridisatie-fluorescentiedetectie in "real time" -modus. Analyse en interpretatie van resultaten. Gedetailleerde informatie over de procedure voor het uitvoeren van PCR-studies, afhankelijk van het gebruikte type apparatuur, is uiteengezet in de "Methodologische richtlijnen voor het gebruik van een reagenskit voor het bepalen en differentiëren van de genotypen van het hepatitis C-virus (HCV) in klinisch materiaal met behulp van de methode van polymerasekettingreactie (PCR) met hybridisatie-fluorescentiedetectie" AmpliSense HCV-genotype-FL ", ontwikkeld door FBUN Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor. EXTRACTIE VAN RNA UIT ONDERZOEKERDE MONSTERS LET OP! Wanneer u met RNA werkt, is het alleen nodig om wegwerpbare plastic verbruiksartikelen te gebruiken met speciale markeringen "RNasefree", "DNase-free". Voor de extractie van RNA, worden de reagenskits aanbevolen door de FBUN TsNII Epidemiologie van de Rospotrebnadzor gebruikt: gebruik de RIBO-sorb-reagenskit, zie de procedure in Bijlage 1 "Extractie van RNA met behulp van de RIBO-sorb-reagenskit". bij gebruik van de RIBO-prep-reagenskit zie de procedure in aanhangsel 2 "Extractie van RNA met behulp van de RIBO-prepreagenskit". WAARSCHUWING! De resulterende bereiding van RNA is niet onderhevig aan opslag, de reactie is omgekeerd 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / blz. 14 van 32

15 FORT FRT-transcriptie moet onmiddellijk na ontvangst van de RNA-probe worden uitgevoerd. GELEIDENDE REVERSE TRANSCRIPTIE REACTIES Het totale volume van het reactiemengsel is 20 μl, inclusief het monstervolume van RNA 10 μl. WAARSCHUWING! Wanneer u met RNA werkt, is het alleen nodig om wegwerpbare plastic verbruiksartikelen te gebruiken met speciale markeringen "RNasefree", "DNase-free". A. Bereiding van buizen voor reverse transcriptie Voor het inbrengen van reagentia en RNA-monsters in buizen worden wegwerptips met filters gebruikt. WAARSCHUWING! De componenten van het reactiemengsel moeten onmiddellijk voorafgaand aan de reverse transcriptiereactie worden gemengd. 1. Ontdooi voor het begin van de werkzaamheden grondig op vortex RT-mix en RT-G-mix-1. Laat druppeltjes uit reageerbuisdoppen lopen. 2. Selecteer het vereiste aantal buizen met een volume van 0,2 of 0,5 ml (afhankelijk van het gebruikte model thermostaat of versterker) voor de reverse transcriptiereactie, rekening houdend met het aantal test- en controlemonsters (één extractiecontrole (OK)). Label de buizen. 3. Bij het uitvoeren van reverse transcriptie van monsters: a) Bereid het reactiemengsel voor op 12 reacties. Voeg hiervoor 5 μl RT-G-mix-1 aan de buis toe met RT-mix, meng grondig op een werveling en neerslag valt uit de dop van de buis. b) Voeg 6 μl revertase (MMlv) toe aan de resulterende oplossing, pipetteer 5 maal, meng op een werveling. Tap de druppels af uit het deksel van de buis door kort centrifugeren. 4. Wanneer reverse transcriptie van minder dan 10 monsters wordt uitgevoerd: Om het reactiemengsel te bereiden, is het noodzakelijk om reagentia per 1 reactie te mengen in de volgende volgorde in de volgende volgorde: 10 μl RT-mix, 0,4 μl RT-G-mix-1 en 0, 5 μl revertase (MMlv) (zie ook tabel 1). Voeg, wanneer toegevoegd aan een mengsel van RT-G-mix-1 en revertase (MMlv), elk reagens ten minste 5 keer af. Meng het mengsel grondig op een vortex en precipiteer de druppels uit de dop van de buis. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 15 van 32

16 FRT-FORMAT LET OP! Revertase (MMlv) is warmtegevoelig! Laat het niet lang op kamertemperatuur liggen! Zet de koelkast onmiddellijk na gebruik in de vriezer! De hoeveelheid reagens per reactie (μl) Het aantal klinische monsters Het schema van bereiding van het reactiemengsel 10,00 0,4 0,5 RT-mix RT-G-mix-1 Revertase (MMlv), 4 3,, 8 3,, 2 4,, 6 4,, 0 5,0 5. Voeg 10 μl van het bereide reactiemengsel toe aan de bereide buizen. Tabel 1 6. Voeg 10 μl RNA-monsters geïsoleerd uit klinische en controlemonsters toe aan de voltooide buizen volgens de labels. Vortex voorzichtig en neerslag uit de dop van de flacon. WAARSCHUWING! Wanneer RNA-monsters worden toegevoegd die zijn geïsoleerd met behulp van de RIBO-sorb-reagenskit, is het noodzakelijk om te voorkomen dat het sorptiemiddel in het reactiemengsel binnendringt. B. Uitvoering van de reverse transcriptiereactie 1. Plaats de buizen in een versterker (thermostaat) gedurende 30 minuten bij 37 ° C. WAARSCHUWING! In het geval van het gebruik van versterkers met een "real-time" detectiesysteem voor reverse transcriptie, is het noodzakelijk het apparaat te programmeren om het juiste programma uit te voeren (zie Tabel 2 en "Richtlijnen voor het gebruik van een reagenskit voor het detecteren en differentiëren van de genotypes van het hepatitis C-virus (HCV)) in klinisch materiaal door de methode van polymerasekettingreactie (PCR) met hybridisatie-fluorescentiedetectie "AmpliSense HCV-genotype-FL" ", ontwikkeld door FBUN Centraal Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie Rospotrebnadzor). Tabel 2 4 Volumes van de ingebrachte reagentia worden gegeven rekening houdend met het aantal bestudeerde monsters (klinische monsters en 1 controle van de RNA-extractie) en de reserve per monster. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 16 van 32

17 FRT FORMAT Programma voor het uitvoeren van de reverse transcriptiereactie voor versterkers met een real-time detectiesysteem 5 Stap Temperatuur, C Duur van de stap Fluorescentiemeting Aantal cycli min 1 2. Voeg na het einde van de reactie 20 μl DNA-buffer toe aan de buizen met een nieuwe filtertip voor elk monster. Meng voorzichtig op een werveling en neerslag van de dop van de flacon. De cdna verkregen in de reverse transcriptiereactie wordt gebruikt voor PCR-amplificatie. Het voltooide cdna-preparaat kan worden opgeslagen bij een temperatuur niet hoger dan min 16 С gedurende 1 week of bij een temperatuur niet hoger dan min 68 С gedurende een jaar. GELIJKTIJDIGE AMPLIFICATIE MET DETECTIE IN DE REALTIME MODUS A. Voorbereiding van versterkingsbuizen De keuze van buizen voor versterking hangt af van de gebruikte versterker. Voor het invoegen van reagentia, cdna-monsters en controlemonsters in reageerbuisjes worden disposable tips met filters gebruikt. Het totale volume van het reactiemengsel is 25 μl, inclusief een monstervolume van cdna 10 μl. WAARSCHUWING! De componenten van het reactiemengsel moeten onmiddellijk voor het uitvoeren van PCR-onderzoeken worden gemengd. Het mengen van reagentia op basis van het vereiste aantal reacties, inclusief het testen van de test en controlemonsters, is noodzakelijk volgens de berekeningstabel (zie tabellen 3, 4). A1. Bereiding van amplificatiebuizen met behulp van de PCR-kit; versie FRT-g1-4 5 Bijvoorbeeld Rotor-Gene 3000 of 6000 (Corbett Research, Australië); Rotor-Gene Q (Qiagen, Duitsland); iq5 (Bio-Rad, Verenigde Staten); Mx3000P (Stratagene, Verenigde Staten); "DT-96" ("DNA-technologie", Rusland) en aanbevolen door FBUN Centraal Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie van Rospotrebnadzor in richtlijnen voor het gebruik van deze reagenskit. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 17 van 32

18 FRT-FORMAT 1. Ontdoe, vortex alle kitreagentia en laat de druppels uit de reageerbuisdoppen ontdooien alvorens met het werk te beginnen. 2. Selecteer het vereiste aantal amplificatiebuizen, rekening houdend met het aantal test- en controlemonsters (één controle van RNA-extractie, twee controles van amplificatie). Type buizen om uit te kiezen, afhankelijk van het gebruikte apparaat. WAARSCHUWING! Elk monster wordt geanalyseerd met behulp van drie reactiemengsels, dus voor elk monster is het nodig om 3 buizen te bereiden. Wanneer u apparaten van het roterende type gebruikt, markeer dan de buizen "sample_1b / 3a", "sample_1a / 2" en "sample_vko / 4", respectievelijk. Gebruik voor het gebruik van apparaten van het tablettype hiervoor een gemarkeerd statief. 3. Selecteer drie buizen van 0,5 ml voor de bereiding van de reactiemengsels. Label de buizen "1b / 3a", "1a / 2" en "VKO / 4". 4. Voeg aan elk van de drie buizen bedoeld voor de bereiding van reactiemengsels, tot 1 reactie toe: 5 μl RT-PCR-mengsel-2-FEP / FRT, 0,5 μl polymerase (TaqF) en 10 μl van het overeenkomstige PCR-mengsel Het HCV-1-FRT genotype (zie ook Tabel 3), het PCR-mengsel-1-FRT van HCV-genotypes 1b / 3a wordt geïntroduceerd in de "1b / 3a" -buis, enz. Meng de resulterende reactiemengsels op een vortex en neerslag druppels uit de dop van de flacon. WAARSCHUWING! De reactiemengsels moeten worden bereid met een marge van 1 monster (zie tabel 3). 5. Voeg aan de buizen bedoeld voor amplificatie, 15 pl van het gerede reactiemengsel in overeenstemming met het label, d.w.z. het reactiemengsel "1b / 3a" wordt in reageerbuizen met het label "sample_1b / 3a", enz. 6. Voeg 10 μl cdna-monsters verkregen in de reverse transcriptiereactie aan de bereide reageerbuisjes toe met de gedispergeerde reactiemengsels in overeenstemming met de markering, en elk monster, inclusief de negatieve extractiecontrole (OK), moet worden toegevoegd aan 3 buizen die de verspreide reactiebuizen bevatten. een mengsel van "1b / 3a", "1a / 2" en "VKO / 4". 7. Voer de controlereacties in: a) Voeg de negatieve controle van PCR (K) toe aan de reageerbuisjes met de 1b / 3a, 1a / 2 en BKO / 4 geschepte reactiemengsels van 10 μl TE-buffer. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 18 van 32

19 FRT-FORMAT b) positieve controle van PCR (K + 1b / 3a) in een buis met het "1b / 3a" -reactiemengsel, voeg 10 μl OTP cdna HCV-genotypes 1b / 3a toe; c) positieve controle van PCR (K + la / 2) in een buis met het reactiemengsel "la / 2" voegt 10 pl OTP cdna HCV-genotypes la / 2 toe; d) positieve controle van PCR (K + VKO / 4) in een reageerbuis met het VKO / 4-reactiemengsel, voeg 10 μl PKO cdna HCV EKO / genotype 4 toe. Schema van bereiding van de reactiemengsels voor de FRT-variant Reagensvolume per reactie (μl) Nummer Nummer klinisch onderzoek monsters van punten 6 10,00 5,00 0,50 6 Aantal klinische monsters + 1 controle van de extractiefase van RNA + 2 controle PCR (N + 3, N aantal klinische monsters). PCR-mix-1-FRT HCV-genotype * RT-PCR-mix-2-FEP / FRT * Tabel 3 Polymerase (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * Volumes van de toegepaste reagentia worden gegeven met een marge van 1 monster. A2. Bereiding van amplificatiebuizen met behulp van de "PCR kit" reagenskit versie FRT-g Voordat u begint met werken, ontdooit u grondig alle reagentia van de kit op de vortex en precipitaat de druppels uit de doppen van de buizen. 2. Selecteer het vereiste aantal amplificatiebuizen, rekening houdend met het aantal test- en controlemonsters (één controle van RNA-extractie, twee controles van amplificatie). Type buizen om uit te kiezen, afhankelijk van het gebruikte apparaat. WAARSCHUWING! Elk monster wordt geanalyseerd met behulp van vier reactiemengsels, dus voor elk monster is het nodig om 4 buizen te bereiden. Bij gebruik van buizen met een volume van 0,2 ml voor instrumenten van het rotortype, markeert u de buizen van respectievelijk "specimen_1b / 3a", "specimen_1a / 2", "specimen_vko / 4" en "specimen_5a / 6". Bij gebruik van apparaten van het tablettype of bij gebruik van gestreept 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 19 van 32

20 FRT-FORMAT-buizen voor instrumenten van het rotatieapparaat gebruiken hiervoor een gemarkeerd statief. 3. Selecteer vier buizen van 0,5 ml voor de bereiding van de reactiemengsels. Label de buizen "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" en "5a / 6". 4. Voeg aan elk van de vier buisjes die bedoeld zijn voor de bereiding van reactiemengsels, tot 1 reactie toe: 5 μl RT-PCR-mengsel-2-FRT HCV-genotype (zie ook Tabel 4), met PCR-mix-1- De HCT FRT-genotypes 1b / 3a worden geïntroduceerd in de "1b / 3a" -buis, enz. Meng de resulterende reactiemengsels op een vortex en neerslag druppels uit de dop van de flacon. Schema voor de bereiding van reactiemengsels voor de FRT-variant Reagensvolume per reactie (μL) Aantal Het aantal klinische testmonsters wijst op 7 10,00 5,00 0,50 FEP / FRT, 0,5 μl polymerase (TaqF) en 10 μl van het overeenkomstige PCR-mengsel -1- PCR-mix-1-FRT HCV-genotype * RT-PCR-mix-2 FEP / FRT * Tabel 4 Polymerase (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * hoeveelheden toegevoegde reagentia worden gegeven met een marge van 1 monster. 5. Voeg aan de buizen bedoeld voor amplificatie, 15 pl van het gerede reactiemengsel in overeenstemming met het label, d.w.z. het reactiemengsel "1b / 3a" wordt in reageerbuizen met het label "sample_1b / 3a", enz. In geval van gebruik voor de reactie van de amplificatie van de gestreepte buizen, moeten de reactiemengsels worden geïntroduceerd in overeenstemming met het schema dat wordt getoond in Fig. 7 Het aantal klinische monsters + 1 controle van het stadium van extractie van RNA + 2 controle PCR (N + 3, N aantal klinische monsters). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 20 van 32

21 FRT-FORMAAT 4 tubes gebruikt voor de productie van een enkel klinisch monster Mengsel "1b / 3a" Mengsel "1a / 2" Mengsel "VKO / 4" Mengsel "5a / 6" Mengsel "1b / 3a" Mengsel "1a / 2" Mengsel BKO / 4 "Mengsel" 5а / 6 "Figuur 1. Schema voor het inbrengen van reactiemengsels en monsters bij gebruik van stripbuizen voor PCR. 6. Voeg 10 μl cdna-monsters verkregen in de reverse transcriptiereactie aan de bereide reageerbuisjes toe met de gedispergeerde reactiemengsels in overeenstemming met de markering, en elk monster, inclusief de negatieve extractiecontrole (OK), moet worden toegevoegd aan 4 buizen die de verspreide reactie bevatten een mengsel van "1b / 3a", "la / 2", "VKO / 4" en "5a / 6". 7. Voer de controlereacties in: a) voeg de negatieve controle van PCR (K) aan de reageerbuisjes toe met de 1b / 3a, 1a / 2, VKO / 4 en 4a / 6a 10 μl TE-bufferreactiemengsels. b) positieve controle van PCR (K + 1b / 3a) in een buis met het reactiemengsel "1b / 3a" voegt 10 μl OTP cdna HCV-genotypes 1b / 3a toe; c) positieve controle van PCR (K + la / 2) in een buis met het reactiemengsel "la / 2" voegt 10 pl OTP cdna HCV-genotypes la / 2 toe; d) positieve controle van PCR (K + VKO / 4) in een reageerbuis met het reactiemengsel VKO / 4, voeg 10 ul PKO cdna HCV VKO / genotype 4 toe; e) positieve controle van PCR (K + 5a / 6) in een buis met het reactiemengsel "5a / 6", voeg 10 μl OTP cdna HCV-genotypen 5a / 6 toe. B. Uitvoering van de versterking met detectie in de "real time" -modus 1. Programmeer het instrument (versterker met het detectiesysteem in de "real time" -modus) om het juiste amplificatieprogramma uit te voeren en het fluorescentiesignaal "AmpliSens-1" te detecteren (zie tabellen 5, 6). ). Tabel 5 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 21 van 32

22 FRT FORMAT Program Amplisens-1 voor apparaten van het roterende type 8 Temperatuur, Duur Aantal metingen Stadium C van het stadium van fluorescentie van Hold / Hold-cycli min 1 Temperaturen 95 5 s Fietsen / s 5 Fietsen 95 5 s Fietsen 2 / FAM / groen, s 40 Cyclus 2 JOE / geel s Tabel 6 AmpliSens-1-programma voor tablets van het type 9 en Smart Cycler II (Cepheid, VS) Stappentemperatuur, duur Meting Nummer C van de fluorescentiestap van cycli min (900 s 10 s) s 95 5 seconden met FAM, JOE / HEX / Cy met 2. Installeer de buizen in de cellen van de reactiemodule van het apparaat. 3. Start de uitvoering van het versterkingsprogramma met de detectie van het fluorescentiesignaal. 4. Aan het einde van het programma gaat u verder met de analyse en interpretatie van de resultaten. ANALYSE EN INTERPRETATIE VAN RESULTATEN Analyse van de resultaten wordt uitgevoerd met behulp van de software die door het instrument wordt gebruikt voor PCR c-detectie in "real time". De fluorescerende signaalaccumulatiecurves worden geanalyseerd op het kanaal voor de FAM-fluorofoor (of vergelijkbaar) en het kanaal voor de JOE-fluorofoor (of vergelijkbaar). De resultaten worden geïnterpreteerd op basis van de aanwezigheid (of afwezigheid) van 8 bijvoorbeeld Rotor-Gene 3000 of 6000 (Corbett Research, Australië), Rotor-Gene Q (Qiagen, Duitsland). 9 Bijvoorbeeld icycler iq5 (Bio-Rad, VS); Mx3000P, Mx3005 (Stratagene, Verenigde Staten); "DT-96" ("DNA-technologie", Rusland) en aanbevolen door FBUN Centraal Onderzoeksinstituut voor Epidemiologie van Rospotrebnadzor in de richtlijnen voor het gebruik van deze reagenskit. 10 Voor het apparaat Smart Cycler II (Cepheid, VS). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 22 van 32

De FRT-FORMAT van de kruising van de fluorescentiekromme met de drempellijn die is ingesteld op het juiste niveau, bepaalt de aanwezigheid (of afwezigheid) voor deze voorbeeld-cdna van de waarde van de drempelcyclus Ct in de overeenkomstige grafiek in de resultatentabel. Het kanaalamplificatieresultaat wordt als positief beschouwd als de fluorescentiekromme een typische S-vormige look heeft voor real-time PCR, eenmaal gekruist met een drempellijn in het gebied met significante fluorescentieversterking, negatief als er geen kenmerkende curve is en geen intersectie met de drempellijn (geen Ct-waarde of Cp) en twijfelachtig in alle andere gevallen. Tabel 7 toont de kanalen waarmee HCV-genotypen voor elk reactiemengsel worden gedetecteerd. Tabel 7 Reactiemengsel "1b / 3a" "1a / 2" "VKO / 4" "5a / 6 11" Kanaal Detecteerbare genotypes HCV FAM / Groen 1b 1a VKO 5a JOE / HEX / Geel / Cy3 3a Registratie van resultaten in controlemonsters Resultaten PCR-onderzoeken worden als betrouwbaar beschouwd indien correcte resultaten worden verkregen voor het doorgeven van controlemonsters in overeenstemming met de evaluatietabel van de resultaten van controlereacties (zie tabel 8). 11 Inbegrepen in de PCR-kit is variant FRT-g1-6. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 23 van 32

24 FRT FORMAT Reactiemengsel Controle OK K K + 1b / 3a Resultaten voor controles van verschillende stadia van de PCR-test FAM / groen Nee Ct-waarde Ontbrekende Ct-waarde Onder de grenswaarde Tabel 8 "1b / 3a" "1a / 2" "BKO / 4 »" 5a / 6 "12 Resultaten van versterking door JOE / HEX / Geel / Cy3-kanaal FAM / Groen JOE / HEX / Geel / Cy3 FAM / Groen JOE / HEX / Geel / Cy3 FAM / Groen JOE / HEX / Geel / Cy3 Ontbrekende waarde Ct Ontbrekende Ct-waarde Onder de grenswaarde K + 1a / 2 * * Ontbrekende Ct-waarde Ontbrekende Ct-waarde Ontbrekende Ct-waarde Ontbrekende Ct-waarde Onder de grenswaarde Ontbrekende Ct-waarde Ontbrekend De Ct-waarde ontbreekt De Ct-waarde ontbreekt De Ct-waarde ontbreekt De Ct-waarde ontbreekt De Ct-waarde ontbreekt De Ct-waarde ontbreekt * * * * * * Onder de grenswaarde Onder de K + Vko-grenswaarde / 4 * * * * * * * * Onder de grenswaarde Onder de K-drempelwaarde + 5a / 6 * * * * * * * Dit reactiemengsel is niet getest. * * Onder de grenswaarde LET OP! De grenswaarden van Ct worden aangegeven in de insert bij de PCR-kit. Registratie van resultaten in de bestudeerde klinische monsters Onder de grenswaarde 1. Het HCV-genotype dat in dit monster aanwezig is, wordt vastgesteld door de amplificatieresultaten te vergelijken in drie (voor de PCR-kit, variant FRT-g1-4) of vier buizen (voor de PCR-kit optie FRT-g1-6) in overeenstemming met de tabel. 7, bovendien: a) Als de Ct-waarde voor het monster voor het monster wordt bepaald, overeenkomend met een enkel HCV RNA-genotype, is het resultaat "Genotype"; b) Als twee of meer Ct-waarden worden bepaald voor een steekproef in de resultatentabel, wordt een genotype met dubbele, drievoudige, enz. bekendgemaakt. Een uitzondering is het volgende geval: als Ct-waarden worden bepaald voor een monster op het VKO / 4-reactiemengsel via het JOE / HEX / Geel / Cy3-kanaal (4 HCV-genotype) en op het 1b / 3a-reactiemengsel op het FAM / Green-kanaal (1b) HCV) en de Ct-waarde voor het 4e genotype meer dan 10 Ct-waarden voor het eerste genotype met 10 of meer cycli, dan is 12 FRT-g1-6-variant opgenomen in de PCR-kit. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 24 van 32

25 FRT-FORMAAT is het resultaat van "Genotype 4". 2. Als in de resultaattabel voor het monster de Ct-waarde alleen wordt bepaald voor CTP (reactie CTP / 4, kanaal FAM / groen) en deze lager is dan de grenswaarde die is aangegeven in het insert, is het resultaat "Het HCV-genotype is niet bepaald". Als bovendien bekend is dat de concentratie HCV-RNA in dit monster binnen de analytische gevoeligheid van de reagenskit ligt, wordt het resultaat gegeven "Het HCV-genotype is niet bepaald vanwege de lage virale lading". 3. Als de Ct-resultaten voor alle genotypen afwezig zijn in de resultaattabel voor het monster en de Ct-waarde voor ASS (via het FAM-kanaal op PCV-mixen-1-FRT HCV EKO / genotype 4) niet is gedefinieerd of de limiet overschrijdt (aangegeven in het bijvoegsel), Het is vereist om de PCR-studie van dit monster te herhalen, te beginnen met het stadium van RNA-extractie. WAARSCHUWING! 1. Als de Ct-waarde in ten minste één monster met een positieve controle van de PCR-fase (K + 1b / 3a, K + 1a / 2, K + VKO / 4 of K + 5a / 6) de in de bijlage gespecificeerde grenswaarde overschrijdt of afwezig is, is het noodzakelijk herhaal de PCR-test voor alle monsters, te beginnen bij de extractiestap. 2. Indien voor negatieve controle van RNA (OC) -extractie ten minste op een van de reactiemengsels "1b / 3a", "la / 2", "5a / 6" langs enig gebruikt kanaal en / of op het reactiemengsel "VKO / 4" "Er wordt een positief signaal gedetecteerd op het JOE / HEX / Geel / Cy3-kanaal, het is noodzakelijk om de PCR-studie te herhalen voor alle monsters waarvoor het HCV-genotype in dit reactiemengsel was bepaald, te beginnen met de RNA-extractiestap. 3. Als voor een negatieve PCR-controle (K) een positief signaal wordt gedetecteerd op elk reactiemengsel langs een van de kanalen, is het noodzakelijk om de PCR-studie te herhalen voor alle monsters waarvoor het HCV-genotype in dit reactiemengsel werd bepaald, te beginnen met de RNA-extractiestap. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 25 van 32

26 HOUDBAARHEID, CONDITIES VAN TRANSPORT EN OPSLAG Vervaldatum. 12 maanden De verlopen reagensset is niet van toepassing. De houdbaarheidsperiode van niet-afgedekte reagentia komt overeen met de houdbaarheidsperiode die op het etiket staat vermeld voor ongeopende reagentia, tenzij anders aangegeven in de instructies. Vervoer. Een set reagentia moet worden vervoerd bij een temperatuur van 2 tot 8 ° C gedurende niet meer dan 5 dagen. Na ontvangst demonteren in overeenstemming met de opgegeven opslagtemperaturen. Storage. Bewaar "RIBO-sorb" en "RIBO-prep" reagenskits bij een temperatuur van 2 tot 8 ° C REVERTA-L en "PCR kit" reagenskits, met uitzondering van OKO, TE-buffer en CTP STI-248-rec bewaard bij een temperatuur niet hoger dan minus 16 ° C. EYE, TE-buffer en CTP STI-248-rec uit de "PCR-kit" moeten worden bewaard bij een temperatuur van 2 tot 8 ° C. PCR-mix-1-FRT HCV-genotypes 1b / 3a, HCV PCR mix-1-FRT genotypes 1a / 2, HCV BKO / genotype PCR mix-1-FRT HCV / genotype 4 en PCR mix-1-FRT HCV genotypen 5a / 6 moeten op een donkere plaats worden bewaard. Vakantie voorwaarden. Voor behandelings- en profylactische en sanitaire instellingen. Klachten over de kwaliteit van de AmpliSense HCV-genotype-FL-reagenskit moeten worden gestuurd naar de fabriek van het Federale Onderzoeks- en Ontwikkelingsinstituut van de Epidemiologie Rospotrebnadzor (Moskou, Novogireevskaya St., 3a) in de afdeling voor terugwinning en training ("495), fax (495), u kunt de beoordelingen en suggesties over de producten van AmpliSense achterlaten door een consumentenprofiel op de website in te vullen: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 26 van 32

27 RNA-EXTRACTIE APPENDIX 1. Extractie van RNA met behulp van de RIBO-sorb-reagenskit Procedure 1. Lysisoplossing en wasoplossing 1 (indien bewaard bij 2 tot 8 ° C), verwarmd tot 60 ° C totdat de kristallen volledig zijn opgelost. 2. Selecteer het vereiste aantal wegwerpbuizen van 1,5 ml (inclusief negatieve extractiecontrole). Label de buizen. 3. Maak aan de onderkant van elke buis 10 μl CTP STI-248-rec. 4. Voeg 450 μl lyseoplossing toe aan de buizen. Label de buizen. Opmerking Met een grote hoeveelheid monsters om de selectieprocedure te vergemakkelijken, wordt toegestaan ​​om een ​​afzonderlijke flacon met lytische oplossing en CTP STI-248-rec (per monster, 450 μl lysisoplossing en 10 μl CTP STI-248-rec) te mengen, gevolgd door scheiding van 450 μl van het mengsel in vooraf bereide buizen van 1,5 ml. 5. Maak in reageerbuizen met lysing-oplossing en ASD elk 100 μl van het monster met behulp van tips met een filter. Voeg in een reageerbuis van de extractie met negatieve controle (OK) 100 μl van de negatieve controle toe. 6. Strak afgesloten monsters moeten grondig worden gemengd op de vortex en gedurende 5 seconden bij 5000 rpm in een microcentrifuge worden gecentrifugeerd om druppels van het binnenoppervlak van de dop van de buis te verwijderen. 7. Resuspendeer het sorptiemiddel door krachtig te vortexen. Voeg 25 μl geresuspendeerde sorptiemiddel toe aan elke buis met een afzonderlijke tip. 8. Roer de inhoud van de buisjes op een werveling en laat gedurende 10 minuten op kamertemperatuur komen, meng grondig om de 2 minuten. 9. Centrifugeer de microcentrifugebuizen bij 7000 g (bijvoorbeeld 10 duizend tpm voor een MiniSpin, Eppendorf-centrifuge) gedurende 1 minuut. 10. Verwijder het supernatant uit elke buis met een afzonderlijke punt met behulp van een vacuümaspirator. 11. Voeg 400 μl wasoplossing toe aan de buizen 1. Vortex totdat het sorbens volledig is geresuspendeerd. Centrifugeer de buizen in een microcentrifuge bij 7000 g gedurende 1 minuut. Selecteer de supernatant 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 27 van 32

28 RNA-EXTRACTIE uit elke buis met een afzonderlijke punt met behulp van een vacuümzuigpomp. 12. Voeg 500 μl wasoplossing toe aan de buizen 3. Vortex tot het sorptiemiddel volledig geresuspendeerd is. Centrifugeer de buizen in een microcentrifuge bij 7000 g gedurende 1 minuut. Verwijder de wasoplossing 3 uit elke buis met een afzonderlijke punt met behulp van een vacuümaspirator. 13. Voeg 400 μl wasoplossing toe aan de buizen 4. Vortex tot het sorptiemiddel volledig geresuspendeerd is. Centrifugeer de buizen in een microcentrifuge bij 7000 g gedurende 1 minuut. Selecteer volledig de wasoplossing 4 uit elke buis met een afzonderlijke punt met behulp van een vacuümafzuiger. 14. Droog het sorptiemiddel door de buizen 15 minuten lang met open kappen in een thermostaat op 60 C te plaatsen. 15. Resuspendeer het sorbens in 50 μl RNA-buffer. Verhit in een thermostaat bij 60 ° C gedurende 2 minuten, meng op een vortex en precipiteer het sorptiemiddel in een centrifuge bij 12.000 g (bijvoorbeeld rpm voor een MiniSpin, Eppendorf-centrifuge) gedurende 1 minuut. WAARSCHUWING! De resulterende bereiding van RNA kan niet worden opgeslagen, de reverse transcriptiereactie moet onmiddellijk na ontvangst van het RNA-monster worden uitgevoerd. Het is noodzakelijk om de RNA-oplossing voor de reactie zeer zorgvuldig te selecteren, zonder het sorptiemiddel te vangen. Als het sorptiemiddel wordt geroerd, moet dit in een centrifuge worden neergeslagen. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 28 van 32

29 RNA-EXTRACTIE-AANHANGSEL 2. Extractie van RNA met behulp van de RIBO-prep reagenskit Procedure 1. Lysisoplossing (indien bewaard bij een temperatuur van 2 tot 8 ° C) wordt tot een temperatuur van maximaal 65 ° C verwarmd totdat de kristallen volledig zijn opgelost. 2. Selecteer het vereiste aantal wegwerpbuizen van 1,5 ml (inclusief negatieve en positieve extractiecontroles). 3. Maak aan de onderkant van elke buis 10 μl CTP STI-248-rec. 4. Voeg 300 μl lysisoplossing aan de buizen toe. Label de buizen. Opmerking Met een grote hoeveelheid monsters om de toewijzingsprocedure te vergemakkelijken, mag een afzonderlijke flacon worden gemengd met de lysisoplossing en CTP STI-248-rec (per μl monster, 300 μl van de oplossing voor lysis en 10 μl CTP STI-248-rec), gevolgd door 300 μl van het mengsel in vooraf bereide buizen van 1,5 ml. 5. Voeg in reageerbuizen met een oplossing voor lyse en EKR 100 μl van elk monster toe met behulp van tips met een filter. Voeg in een reageerbuis van de extractie met negatieve controle (OK) 100 μl van de negatieve controle toe. 6. Vortex de inhoud van de buizen, centrifugeer gedurende 5 seconden in een microcentrifuge om druppels te verwijderen van het binnenoppervlak van het deksel en verwarm gedurende 5 minuten bij 65 ° C in een thermostaat. 7. Voeg 400 μl precipitatieoplossing aan de buizen toe, meng grondig op een werveling. 8. Centrifugeer de microcentrifugebuizen bij 12.000 g (bijvoorbeeld rpm voor een MiniSpin, Eppendorf-centrifuge) gedurende 5 minuten. 9. Verwijder het supernatant voorzichtig zonder het sediment aan te raken, met behulp van een vacuümzuigapparaat en een afzonderlijke punt voor elk monster. 10. Voeg 500 μl wasoplossing toe aan de buizen 3, sluit de deksels goed, spoel het bezinksel zorgvuldig en draai de buizen 3-5 keer. Het is mogelijk om de procedure gelijktijdig voor alle buizen uit te voeren, hiervoor is het nodig om de buizen in een rek met een deksel of een ander statief bovenop te bedekken, erop te drukken en het statief om te draaien. 11. Centrifugeer gedurende 12 minuten bij 12.000 g in een microcentrifuge. 12. Selecteer voorzichtig, zonder het sediment op te vangen, het supernatant, 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 29 van 32

30 RNA-EXTRACTIE met behulp van een vacuümaspirator en een afzonderlijke punt voor elk monster. 13. Voeg aan de tubes 200 μl wasoplossing 4 toe, sluit de deksels goed af en spoel het neerslag zorgvuldig, waarbij de buizen 3-5 maal worden gedraaid. Het is mogelijk om de procedure gelijktijdig voor alle buizen uit te voeren, hiervoor is het noodzakelijk om de buizen in een rek met een deksel of een andere standaard bovenop te bedekken, erop te drukken en het statief om te draaien. 14. Centrifugeer bij 12 duizend g gedurende 2 minuten in een microcentrifuge. 15. Zorgvuldig, zonder het sediment op te vangen, selecteert u zorgvuldig het supernatant met behulp van een vacuümaspirator en een afzonderlijke tip voor elk monster. 16. Plaats de buizen in een thermostaat bij 65 C gedurende 5 minuten om het neerslag te drogen (de doppen van de buizen moeten worden geopend). 17. Voeg 50 μl RNA-buffer aan de buizen toe. Roer de vortex. Plaats 5 minuten in een thermostaat op 65 ° C en schud af en toe op een vortex. 18. Centrifugeer de buizen bij 12 duizend g gedurende 1 minuut in een microcentrifuge. Het supernatant bevat gezuiverd RNA. Monsters zijn gereed voor de formulering van de reactie van reverse transcriptie en PCR. WAARSCHUWING! De resulterende bereiding van RNA kan niet worden opgeslagen, de reverse transcriptiereactie moet onmiddellijk na ontvangst van het RNA-monster worden uitgevoerd. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 30 van 32

31 SYMBOLEN GEBRUIKT IN GEDRUKT PRODUCT Catalogusnummer Batchnummer Let op! Raadpleeg de bijbehorende documentatie Maximaal aantal tests Product voor in-vitrodiagnostiek Gebruik tot datum Wijziging Temperatuurlimiet Bovengrens temperatuur Raadpleeg de handleiding Vermijd direct zonlicht Datum van fabricage Fabrikant 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) 31 van 32

32 Rev. LA IvI Waar wijzigingen aanbrengen Voettekst voettekst Lijst met wijzigingen De essentie van de wijzigingen Toegevoegd catalogusnummer R-V1-G (1-4) - 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) voor de formulierconfiguratie 3 Catalogusnummers verwijderd voor vormen van configuraties 1 en 4 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / pagina 32 van 32

Amplisens hcv fl

Stadia van hepatitis c
Mpiviropack-prijs

Alles over Hepatitis C

Behandeling, symptomen, medicijnen

Hepatitis met rna amplicens hcv fl

Hepatitis met rna amplicens hcv fl

Hepatitis is een acute en chronische inflammatoire aandoening van de lever, niet focaal, maar wijdverspreid. Bij verschillende hepatitis zijn de infectiemethoden verschillend, ze verschillen ook in de snelheid van ziekteprogressie, klinische manifestaties, methoden en prognoses van therapie. Zelfs de symptomen van verschillende soorten hepatitis zijn anders. Bovendien lijken sommige symptomen sterker dan andere, wat wordt bepaald door het type hepatitis.

Belangrijkste symptomen

  1. Geelheid. Het symptoom komt vaak voor en vanwege het feit dat bilirubine in het bloed van de patiënt terechtkomt in het geval van leverbeschadiging. Het bloed circuleert door het lichaam en verspreidt het door de organen en weefsels en verft ze geel.
  2. Het uiterlijk van pijn in het rechter hypochondrium. Het treedt op vanwege de toename van de grootte van de lever, wat leidt tot het verschijnen van pijn, die saai en langdurig zijn of paroxysmaal van aard zijn.
  3. De verslechtering van de gezondheid, gepaard gaande met koorts, hoofdpijn, duizeligheid, indigestie, slaperigheid en lethargie. Dit alles is een gevolg van de actie op het lichaam van bilirubine.

Hepatitis acuut en chronisch

Patiënten met hepatitis hebben acute en chronische vormen. In de acute vorm manifesteren ze zich in het geval van virale schade aan de lever, en ook als er vergiftiging door verschillende soorten vergiften is geweest. In acute vormen van de ziekte verslechtert de toestand van patiënten snel, wat bijdraagt ​​aan de versnelde ontwikkeling van symptomen.

Met deze vorm van de ziekte is het best mogelijke gunstige projecties. Met uitzondering van het chronisch worden. In acute vorm wordt de ziekte gemakkelijk gediagnosticeerd en gemakkelijker te behandelen. Onbehandelde acute hepatitis ontwikkelt zich gemakkelijk tot een chronische vorm. Soms met ernstige vergiftiging (bijvoorbeeld alcohol), vindt de chronische vorm onafhankelijk plaats. In de chronische vorm van hepatitis, vindt het proces van vervanging van levercellen door bindweefsel plaats. Het is zwak uitgedrukt, het is traag en daarom blijft het soms niet gediagnosticeerd tot het begin van cirrose van de lever. Chronische hepatitis wordt slechter behandeld en de prognose voor de genezing ervan is minder gunstig. In het acute verloop van de ziekte wordt de gezondheidstoestand aanzienlijk verslechterd, geelzucht ontstaat, intoxicatie optreedt, de functionele functie van de lever afneemt en het bilirubine-gehalte in het bloed toeneemt. Met de tijdige detectie en effectieve behandeling van acute hepatitis herstelt de patiënt het vaakst. Bij een ziekteduur van meer dan zes maanden wordt hepatitis chronisch. De chronische vorm van de ziekte leidt tot ernstige aandoeningen in het lichaam - de milt en de lever worden vergroot, metabolisme wordt verstoord, complicaties zoals levercirrose en oncologische formaties komen voor. Als een patiënt immuniteit heeft verlaagd, het behandelingsregime niet correct is of er is alcoholafhankelijkheid, dan is de overgang naar chronische vorm van hepatitis een bedreiging voor het leven van de patiënt.

Hepatitis rassen

Hepatitis heeft verschillende typen: A, B, C, D, E, F, G, ze worden ook virale hepatitis genoemd, omdat de oorzaak van hun optreden het virus is.

Dit type hepatitis wordt ook de ziekte van Botkin genoemd. Het heeft een incubatieperiode van 7 dagen tot 2 maanden. Het pathogeen, het RNA-virus, kan van een zieke persoon worden overgedragen op een gezonde persoon door middel van producten van lage kwaliteit en water, contact met huishoudelijke artikelen die door de patiënt worden gebruikt. Hepatitis A is mogelijk in drie vormen, ze zijn verdeeld volgens de kracht van de manifestatie van de ziekte:

  • in acute vorm met geelzucht is de lever ernstig beschadigd,
  • met subacute zonder geelzucht, kunnen we praten over een lichtere versie van de ziekte,
  • in de subklinische vorm kan men de symptomen zelfs niet opmerken, hoewel de besmette persoon de bron van het virus is en anderen kan infecteren.

Deze ziekte wordt ook serumhepatitis genoemd. Vergezeld van een toename van de lever en milt, het optreden van pijn in de gewrichten, braken, temperatuur, schade aan de lever. Het komt voor in acute of in chronische vormen, wat wordt bepaald door de immuniteit van de patiënt. Manier van besmetting: tijdens injecties met schending van hygiënische voorschriften, geslachtsgemeenschap, tijdens bloedtransfusie, het gebruik van slecht gedesinfecteerde medische instrumenten. De duur van de incubatieperiode is 50 ÷ 180 dagen. De incidentie van hepatitis B wordt verminderd door vaccinatie.

Dit type ziekte is een van de ernstigste ziekten, omdat het vaak gepaard gaat met cirrose of leverkanker die later tot de dood leidt. De ziekte is slecht ontvankelijk voor behandeling, en bovendien, nadat hij eenmaal hepatitis C heeft gehad, kan een persoon opnieuw worden geïnfecteerd met dezelfde aandoening. Het is niet gemakkelijk om HCV te genezen: na een acute hepatitis C-ziekte herstelt 20% van de patiënten en bij 70% van de patiënten is het lichaam niet in staat zichzelf van het virus te genezen en de ziekte wordt chronisch. Het vaststellen van de reden waarom sommigen zelf genezen zijn, terwijl andere dat niet zijn, is nog niet gelukt. De chronische vorm van hepatitis C zelf zal niet verdwijnen en moet daarom worden behandeld. Diagnose en behandeling van de acute vorm van HCV wordt uitgevoerd door een specialist infectieziekten, de chronische vorm van de ziekte is een hepatoloog of een gastro-enteroloog. Het is mogelijk om geïnfecteerd te raken tijdens transfusies van plasma of bloed van een geïnfecteerde donor, bij gebruik van medische hulpmiddelen van slechte kwaliteit, seksueel, en de zieke moeder stuurt de infectie door naar het kind. Hepatitis C-virus (HCV) verspreidt zich snel over de hele wereld, het aantal patiënten heeft al ruim anderhalf miljoen mensen overschreden. Eerder reageerde HCV niet goed op de therapie, maar nu kan de ziekte worden genezen met behulp van moderne, direct werkende antivirale middelen. Alleen deze therapie is vrij duur en daarom kan niet iedereen het betalen.

Dit type hepatitis D is alleen mogelijk als het wordt gecoïnfecteerd met het hepatitis B-virus (co-infectie is een geval van infectie van een enkele cel met virussen van verschillende typen). Hij wordt vergezeld door een massale leverbeschadiging en een acuut verloop van de ziekte. Manieren van infectie - het virus van de ziekte in het bloed van een gezond persoon krijgen van een virusdrager of een ziek persoon. De incubatieperiode duurt 20 ÷ 50 dagen. Uiterlijk lijkt het verloop van de ziekte op hepatitis B, maar de vorm ervan is ernstiger. Kan chronisch worden door later naar cirrose te gaan. Het is mogelijk om een ​​vaccinatie uit te voeren, vergelijkbaar met die voor hepatitis B.

Licht herinnerend aan hepatitis A door de loop en het mechanisme van transmissie, omdat het ook op dezelfde manier door bloed wordt uitgezonden. Het kenmerk is het optreden van bliksemsnelle vormen, die in een periode van maximaal 10 dagen de dood veroorzaken. In andere gevallen kan het effectief worden genezen en is de prognose voor herstel vaak gunstig. Een uitzondering kan zwangerschap zijn, omdat het risico om een ​​kind te verliezen bijna 100% is.

Dit type hepatitis is niet voldoende onderzocht. Het is alleen bekend dat de ziekte wordt veroorzaakt door twee verschillende virussen: één werd geïsoleerd uit het bloed van donoren, de tweede werd gevonden in de ontlasting van een patiënt die hepatitis kreeg na een bloedtransfusie. Tekenen: het optreden van geelzucht, koorts, ascites (vochtophoping in de buikholte), een toename van de grootte van de lever en de milt, een toename van de niveaus van bilirubine en leverenzymen, het optreden van veranderingen in de urine en ontlasting, evenals algemene intoxicatie van het lichaam. Effectieve methoden voor de behandeling van hepatitis F zijn nog niet ontwikkeld.

Dit type hepatitis is vergelijkbaar met hepatitis C, maar niet zo gevaarlijk als het niet bijdraagt ​​aan de ontwikkeling van cirrose en leverkanker. Cirrose kan alleen optreden in het geval van gelijktijdige infectie van hepatitis G en C.

diagnostiek

Bij hun symptomen lijkt virale hepatitis op elkaar, net als bij sommige andere virale infecties. Om deze reden is het moeilijk om de exacte diagnose van de patiënt vast te stellen. Om het type hepatitis en het juiste recept te verduidelijken, zijn daarom bloedonderzoek in het laboratorium vereist om de markers te identificeren - indicatoren die per type virus individueel zijn. Na de aanwezigheid van dergelijke markers en hun verhouding te hebben vastgesteld, is het mogelijk om het stadium van de ziekte, zijn activiteit en de mogelijke uitkomst te bepalen. Om de dynamiek van het proces te volgen, wordt het onderzoek na een bepaalde periode herhaald.

Hoe hepatitis C te behandelen

De huidige behandelingsregimes voor chronische vormen van HCV worden teruggebracht tot een combinatie van antivirale therapie, waaronder direct werkende antivirale middelen zoals sofosbuvir, velpatasvir, daclatasvir en ledipasvir in verschillende combinaties. Soms worden ribavirine en interferonen toegevoegd om de effectiviteit te verbeteren. Deze combinatie van actieve stoffen stopt de replicatie van virussen en bewaart de lever tegen hun destructieve effecten. Deze therapie heeft verschillende nadelen:

  1. De kosten van geneesmiddelen om het hepatitis B-virus te bestrijden zijn hoog, niet iedereen kan ze krijgen.
  2. De acceptatie van individuele medicijnen gaat gepaard met onaangename bijwerkingen, waaronder koorts, misselijkheid en diarree.

De duur van de behandeling van chronische vormen van hepatitis duurt van enkele maanden tot een jaar, afhankelijk van het genotype van het virus, de mate van schade aan het lichaam en de gebruikte medicijnen. Omdat hepatitis C voornamelijk de lever aantast, moeten patiënten een strikt dieet volgen.

Kenmerken van HCV-genotypen

Hepatitis C is een van de gevaarlijkste virale hepatitis. De ziekte wordt veroorzaakt door een RNA-bevattend virus, Flaviviridae genaamd. Hepatitis C-virus wordt ook wel 'aanhankelijke moordenaar' genoemd. Hij kreeg zo'n niet-vleiend epitheton omdat de ziekte in het beginstadium helemaal geen symptomen vertoonde. Er zijn geen tekenen van klassieke geelzucht en er is geen pijn in het rechtergedeelte van het hypochondrium. Het detecteren van de aanwezigheid van het virus kan niet eerder dan een paar maanden na infectie plaatsvinden. En daarvoor is de reactie van het immuunsysteem volledig afwezig en is het onmogelijk om markers in het bloed te detecteren en daarom is het niet mogelijk om genotypering uit te voeren. Een speciaal kenmerk van HCV is ook het feit dat nadat het de bloedbaan binnengaat tijdens het reproductieproces, het virus snel begint te muteren. Dergelijke mutaties interfereren met het immuunsysteem van de geïnfecteerde om zich aan te passen en de ziekte te bestrijden. Als gevolg hiervan kan de ziekte verscheidene jaren zonder enige symptomen duren, waarna cirrose of een kwaadaardige tumor bijna zonder een plakje verschijnt. En in 85% van de gevallen wordt de ziekte van de acute vorm chronisch. Het hepatitis C-virus heeft een belangrijke eigenschap - een verscheidenheid aan genetische structuur. Hepatitis C is een verzameling virussen, ingedeeld volgens de varianten van hun structuur en onderverdeeld in genotypen en subtypen. Een genotype is de som van genen die voor overerfde eigenschappen coderen. Tot nu toe zijn 11 genotypen van het hepatitis C-virus, die hun eigen subtypen hebben, bekend voor de geneeskunde. Het genotype wordt aangeduid met cijfers van 1 tot 11 (hoewel in klinische studies genotypes hoofdzakelijk 1 ÷ 6 worden gebruikt), en subtypen, met behulp van de letters van het Latijnse alfabet:

In verschillende landen worden HCV-genotypes op verschillende manieren verspreid, bijvoorbeeld in Rusland kan men het vaakst worden gevonden van eerste tot derde. De ernst van de ziekte hangt af van het type genotype, ze bepalen het behandelingsregime, de duur en het resultaat van de behandeling.

Hoe HCV-stammen zich over de planeet verspreiden

Over het hele grondgebied van de wereld worden hepatitis C-genotypes heterogeen gedistribueerd, en meestal zijn de genotypes 1, 2, 3 te vinden en voor individuele territoria lijkt dit zo:

  • In West-Europa en de oostelijke regio's zijn genotypes 1 en 2 het meest voorkomend,
  • in de VS, subtypes 1a en 1b,
  • In Noord-Afrika is genotype 4 het meest voorkomend.

Een risico op een mogelijke HCV-infectie zijn mensen met bloedaandoeningen (tumoren van het hematopoëtische systeem, hemofilie, enz.), Evenals patiënten die worden behandeld in de dialyse-eenheden. Genotype 1 wordt beschouwd als de meest voorkomende in de wereld, het is goed voor

50% van het totale aantal gevallen. De tweede meest voorkomende is genotype 3 met iets meer dan 30%. De verspreiding van HCV in heel Rusland heeft aanzienlijke verschillen met de wereld of Europese versies:

  • genotype 1b is verantwoordelijk voor

50% van de gevallen

  • op genotype 3a

    20%

  • hepatitis 1a geïnfecteerd

    10% van de patiënten

  • hepatitis met genotype 2 gevonden in

    Maar niet alleen de moeilijkheid van HCV-therapie hangt af van het genotype. De volgende factoren beïnvloeden ook de effectiviteit van de behandeling:

    • leeftijd van patiënten. De kans op genezing is veel hoger voor jongeren
    • vrouwen zijn gemakkelijker te herstellen dan mannen
    • de mate van leverschade is belangrijk - het gunstige resultaat is hoger met minder schade,
    • de omvang van de virale lading - hoe kleiner het virus in het lichaam op het moment van de behandeling, hoe effectiever de therapie,
    • gewicht van de patiënt: hoe hoger het is, hoe gecompliceerder de behandeling is.

    Daarom wordt het behandelingsregime gekozen door de behandelende arts op basis van de hierboven genoemde factoren, genotypering en aanbevelingen van de EASL (European Association for Liver Diseases). EASL houdt zijn aanbevelingen constant up-to-date en corrigeert, als nieuwe, effectieve geneesmiddelen voor de behandeling van hepatitis C verschijnen, de aanbevolen regimes.

    Wie loopt er risico op een HCV-infectie?

    Zoals bekend, wordt het hepatitis C-virus doorgegeven via de bloedbaan en daarom is het hoogstwaarschijnlijk geïnfecteerd:

    • getransfundeerde patiënten
    • patiënten en cliënten in tandartspraktijken en medische instellingen, waar medische hulpmiddelen onjuist zijn gesteriliseerd,
    • door niet-steriele instrumenten kan het gevaarlijk zijn om nagel- en schoonheidssalons te bezoeken,
    • Piercing- en tattoo-liefhebbers kunnen ook last hebben van slecht behandelde instrumenten,
    • er is een hoog risico op infectie voor degenen die medicijnen gebruiken vanwege herhaald gebruik van niet-steriele naalden,
    • de foetus kan geïnfecteerd zijn door een moeder die besmet is met hepatitis C,
    • tijdens geslachtsgemeenschap kan de infectie ook het lichaam van een gezond persoon binnendringen.

    Wat is de behandeling van hepatitis C?

    Hepatitis C-virus werd om een ​​reden als een "gevoelig" moordenaarsvirus beschouwd. Het kan zichzelf jarenlang niet laten zien, waarna het plotseling verschijnt in de vorm van complicaties vergezeld van cirrose of leverkanker. Immers, meer dan 177 miljoen mensen in de wereld hebben de diagnose HCV gesteld. De behandeling, die tot 2013 werd gebruikt, combineerde injecties van inetferferon en ribavirine, gaf patiënten een kans op genezing, niet meer dan 40-50%. En bovendien ging het gepaard met ernstige en pijnlijke bijwerkingen. De situatie veranderde in de zomer van 2013 nadat het Amerikaanse farmaceutische bedrijf Gilead Sciences de substantie sofosbuvir had gepatenteerd, die werd geproduceerd als een geneesmiddel onder de merknaam Sovaldi, waarvan 400 mg van het geneesmiddel deel uitmaakte. Het is het eerste direct werkende antivirale medicijn (DAA) geworden dat HCV tegengaat. De resultaten van de klinische onderzoeken met sofosbuvir verheugden artsen met de prestaties, die afhankelijk van het genotype 85 ÷ 95% bereikten, terwijl de duur van de kuur vergeleken met de behandeling met interferonen en ribavirine meer dan verdubbelde. En hoewel het farmaceutische bedrijf Gilead patenteerde op sofosbuvir, werd het in 2007 gesynthetiseerd door Michael Sofia, een medewerker van Pharmasett, later overgenomen door Gilead Sciences. Uit de naam van Michael heette sofosbuvir de stof die door hem werd gesynthetiseerd. Michael Sophia zelf, samen met een groep wetenschappers die een aantal ontdekkingen deed die de aard van HCV openbaarden, waardoor hij een effectief medicijn voor zijn behandeling kon creëren, ontving de Lasker-DeBakey-prijs voor klinisch medisch onderzoek. Nou, bijna alle winst van de verkoop van een effectief nieuw product ging naar Gilead, dat monopolistisch hoge prijzen stelde aan Sovaldi. Bovendien verdedigde het bedrijf zijn ontwikkeling met een speciaal patent, volgens hetwelk Gilead en sommige van zijn partnerbedrijven eigenaar werden van het exclusieve recht om de originele DAA's te produceren. Als gevolg hiervan verdiende Gilead tijdens de eerste twee jaar van de verkoop van het medicijn herhaaldelijk alle kosten die het bedrijf had gemaakt bij het verwerven van Pharmasett, het verkrijgen van een patent en daaropvolgende klinische proeven.

    Wat is sofosbuvir?

    De effectiviteit van dit medicijn in de strijd tegen HCV was zo hoog dat nu bijna geen behandelregime kan zonder het gebruik ervan. Sofosbuvir wordt niet aanbevolen voor gebruik als monotherapie, maar als het in combinatie wordt gebruikt, vertoont het buitengewoon goede resultaten. Aanvankelijk werd het medicijn gebruikt in combinatie met ribavirine en interferon, waardoor het in ongecompliceerde gevallen mogelijk was om in slechts 29 weken een remedie te bereiken. En dit ondanks het feit dat alleen de behandeling met interferon en ribavirine twee keer minder effectief was en de duur ervan soms langer was dan 40 weken. Na 2013 bracht elk volgend jaar nieuws over de opkomst van steeds meer nieuwe geneesmiddelen die met succes het hepatitis C-virus bestrijden:

    • In 2014 verscheen Daclatasvir
    • 2015 was het geboortejaar van Ledipasvir,
    • 2016 verheugde zich over de oprichting van velpatasvir.

    Daclatasvir werd vrijgegeven door Bristol-Myers Squibb in de vorm van het medicijn Daklinza, dat 60 mg actief bestanddeel bevat. De volgende twee stoffen werden gemaakt door de wetenschappers van Gilead en omdat geen van hen geschikt was voor monotherapie, gebruikten ze alleen geneesmiddelen in combinatie met sofosbuvir. Om de therapie te vergemakkelijken, brachten de voorzichtig opnieuw gecreëerde geneesmiddelen onmiddellijk vrij in combinatie met sofosbuvir. Dus er waren drugs:

    • Harvoni, een combinatie van sofosbuvir 400 mg en ledipasvir 90 mg,
    • Epclusa, waaronder sofosbuvir 400 mg en velpatasvir 100 mg.

    Bij de behandeling met daclatasvir werden twee verschillende geneesmiddelen, Sovaldi en Daclins, ingenomen. Elk van de gepaarde combinaties van actieve ingrediënten werd gebruikt om bepaalde HCV-genotypen te behandelen volgens de behandelingsregimes aanbevolen door EASL. En alleen de combinatie van sofosbuvir met velpatasvir bleek pangenotypisch (universeel) te zijn. Epclus genas alle genotypes van hepatitis C met vrijwel hetzelfde hoge rendement van ongeveer 97 ÷ 100%.

    De opkomst van generieke geneesmiddelen

    Klinische onderzoeken bevestigden de effectiviteit van de behandeling, maar al deze zeer effectieve geneesmiddelen hadden één belangrijk nadeel - te hoge prijzen, waardoor ze niet het grootste deel van de zieke konden verwerven. De monopolistisch hoge prijzen voor producten die door Gilead werden geïnstalleerd, veroorzaakten verontwaardiging en schandalen, waardoor de octrooihouders bepaalde concessies moesten doen, waardoor sommige bedrijven uit India, Egypte en Pakistan licenties kregen om analogen (generieke geneesmiddelen) van dergelijke effectieve en gewilde geneesmiddelen te produceren. Bovendien leidde de strijd tegen patenthouders, het aanbieden van medicijnen voor behandeling tegen onbevoorrechtelijk hoge prijzen, India, als een land waar miljoenen patiënten met hepatitis C in een chronische vorm leven. Als gevolg van deze strijd gaf Gilead licenties en patentontwikkelingen aan elf Indiase bedrijven voor de eerste vrijgave van sofosbuvir en vervolgens hun andere nieuwe producten. Na het verkrijgen van licenties begonnen de Indiase fabrikanten al snel met de productie van generieke geneesmiddelen, waarbij ze hun eigen merknamen aan gefabriceerde geneesmiddelen toekenden. Zo verscheen eerst de generieke Sovaldi, toen Daklinza, Harvoni, Epclusa en India de wereldleider in hun productie. Volgens de licentieovereenkomst betalen Indiase fabrikanten 7% van hun inkomsten in het voordeel van patenthouders. Maar zelfs met deze betalingen waren de kosten van in India geproduceerde generieke geneesmiddelen tien keer minder dan die van de originelen.

    Werkingsmechanismen

    Zoals eerder gemeld, zijn de opkomende HCV-behandelingsregimes gerelateerd aan DAA's en werken direct op het virus. Terwijl het eerder werd gebruikt voor de behandeling van interferon met ribavirine versterkte het het menselijke immuunsysteem, waardoor het lichaam de ziekte kon weerstaan. Elk van de stoffen werkt op zijn eigen manier op het virus in:

    1. Sofosbuvir blokkeert RNA-polymerase, waardoor virale replicatie wordt geremd.
    1. Daclatasvir, ledipasvir en velpatasvir zijn NS5A-remmers die de verspreiding van virussen en de penetratie ervan in gezonde cellen voorkomen.

    Met een dergelijk directioneel effect kun je HCV succesvol bestrijden, met behulp van sofosbuvir in combinatie met daklatasvir, ledipasvir en velpatasvir voor therapie. Soms, om het effect op het virus te versterken, wordt een derde component toegevoegd aan het paar, meestal ribavirine.

    Generieke fabrikanten uit India

    De farmaceutische bedrijven in het land hebben gebruik gemaakt van de licenties die aan hen zijn verleend en nu laat India de volgende generieke geneesmiddelen van Sovaldi vrij:

    • Hepcvir - fabrikant Cipla Ltd.,
    • Hepcinat - Natco Pharma Ltd.,
    • Cimivir - Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • MyHep is een fabrikant van Mylan Pharmaceuticals Private Ltd.,
    • SoviHep - Zydus Heptiza Ltd.,
    • Sofovir is een fabrikant van Hetero Drugs Ltd.,
    • Resof - geproduceerd door Dr Reddy # 8217, s Laboratories,
    • Virso - releases Strides Arcolab.

    Analogen van Daklins worden ook in India vervaardigd:

    • Natdac door Natco Pharma,
    • Dacihep van Zydus Heptiza,
    • Daclahep van Hetero Drugs,
    • Dactovin van Strides Arcolab,
    • Daclawin van Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • Mydacla van Mylan Pharmaceuticals.

    Na Gilead beheersten Indiase medicijnfabrikanten de Harvoni-productie, wat resulteerde in de volgende generieken:

    • Ledifos - Hetero Releases
    • Hepcinat LP - Natco,
    • Myhep LVIR - Mylan,
    • Hepcvir L - Cipla Ltd.,
    • Cimivir L - Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • LediHep - Zydus.

    En in 2017 was de productie van de volgende Indiase generieke geneesmiddelen Epclusi onder de knie:

    • Velpanat heeft Natco Pharma vrijgegeven,
    • Velasof heeft Hetero Drugs onder de knie,
    • SoviHep V begon het bedrijf Zydus Heptiza te produceren.

    Zoals u kunt zien, blijven Indiase farmaceutische bedrijven niet achter bij de Amerikaanse fabrikanten, waarbij ze snel de nieuw ontwikkelde geneesmiddelen beheersen, terwijl ze alle kwalitatieve, kwantitatieve en therapeutische eigenschappen in de gaten houden. Doorstaan ​​inclusief farmacokinetische bio-equivalentie in relatie tot de originelen.

    Algemene vereisten

    Een generiek geneesmiddel is een medicijn dat in staat is om de behandeling met dure originele geneesmiddelen te vervangen door een octrooi in termen van zijn basale farmacologische eigenschappen. Ze kunnen worden vrijgegeven, zowel wanneer ze beschikbaar zijn en wanneer er geen licentie is, alleen door de aanwezigheid wordt de analoog in licentie gegeven. In het geval van licenties voor Indiase farmaceutische bedrijven heeft Gilead hen ook productietechnologie verstrekt, waardoor licentiehouders recht hebben op een onafhankelijk prijsbeleid. Om een ​​analoog van een medicijn als een generiek geneesmiddel te kunnen beschouwen, moet het voldoen aan een aantal parameters:

    1. U moet zich houden aan de verhouding van de belangrijkste farmaceutische componenten bij het opstellen van zowel kwalitatieve als kwantitatieve normen.
    1. Volg de relevante internationale normen.
    1. Verplichte naleving van de juiste productieomstandigheden is vereist.
    1. Bij de preparaten moet een geschikt equivalent van de absorptieparameters worden aangehouden.

    Het is vermeldenswaard dat de WHO op zijn hoede is om de beschikbaarheid van medicijnen te waarborgen, die dure merkgeneesmiddelen willen vervangen met behulp van budgetgenerics.

    Egyptian Soferbuvir Generics

    In tegenstelling tot India zijn de Egyptische farmaceutische bedrijven geen wereldleider geworden in de productie van generieke geneesmiddelen voor hepatitis C, hoewel ze ook de productie van analogen sofosbuvir onder de knie hebben. In het grootste deel van hun analogen is echter geen licentie:

    • MPI Viropack, produceert het medicijn Marcyrl Pharmaceutical Industries # 8229, een van de allereerste Egyptische generieke geneesmiddelen,
    • Heterosofir, uitgegeven door Pharmed Healthcare. Het is de enige generieke licentie in Egypte. Op de verpakking, onder het hologram, is een code verborgen, waarmee de originaliteit van het preparaat op de website van de fabrikant kan worden gecontroleerd, waardoor de vervalsing wordt uitgesloten,
    • Grateziano, vervaardigd door Pharco Pharmaceuticals,
    • Sofolanork, geproduceerd door Vimeo,
    • Sofocivir, geproduceerd door ZetaPhar.

    Generics voor het bestrijden van hepatitis uit Bangladesh

    Bangladesh is een ander land dat in grote hoeveelheden generieke geneesmiddelen tegen HCV produceert. Bovendien heeft dit land zelfs geen vergunningen nodig voor de productie van analogen van merkgeneesmiddelen, aangezien zijn farmaceutische bedrijven tegen 2030 dergelijke medische voorbereidingen mogen treffen zonder de aanwezigheid van geschikte licentiedocumenten. De meest bekende en uitgerust met de nieuwste technologie is het farmaceutische bedrijf Beacon Pharmaceuticals Ltd. Het project van zijn productiecapaciteit is gecreëerd door Europese experts en voldoet aan internationale normen. Beacon geeft de volgende generieke geneesmiddelen vrij voor de behandeling van het hepatitis C-virus:

    • Soforal - generieke sofosbuvir, bevat de werkzame stof 400 mg. In tegenstelling tot traditionele verpakkingen in flesjes van 28 stuks, wordt Sophoral geproduceerd in de vorm van blisters van 8 tabletten in één plaat,
    • Daclavir is een generieke Daclatasvir, één tablet van het geneesmiddel bevat 60 mg van de werkzame stof. Het wordt ook geproduceerd in de vorm van blisters, maar elke schijf bevat 10 tabletten,
    • Sofosvel is een generieke Epclusa, bevat sofosbuvir 400 mg en velpatasvir 100 mg. Pangenotypic (universeel) geneesmiddel, effectief in de behandeling van HCV genotypes 1 ÷ 6. En in dit geval is er geen gebruikelijke verpakking in flessen, tabletten zijn verpakt in blisters van 6 stuks in elke plaat.
    • Darvoni is een complex geneesmiddel dat sofosbuvir 400 mg en daclatasvir 60 mg combineert. Combineer indien nodig sofosbuvir-therapie met daklatasvir, gebruik drugs van andere fabrikanten, u moet een pil van elk type nemen. En Beacon bracht ze samen in één pil. Darvoni is verpakt in blisters van 6 tabletten in één plaat, alleen verzonden voor export.

    Bij de aanschaf van preparaten van Beacon op basis van de loop van de behandeling, dient men rekening te houden met de originaliteit van hun verpakking om de hoeveelheid die nodig is voor de behandeling te kopen. De beroemdste Indiase farmaceutische bedrijven Zoals hierboven vermeld, is India, nadat de farmaceutische bedrijven van het land licenties hebben ontvangen voor het afgeven van generieke geneesmiddelen voor HCV-therapie, een wereldleider in hun productie geworden. Maar onder de veelheid van alle bedrijven, is het de moeite waard er een paar op te noemen, waarvan de producten in Rusland de bekendste zijn.

    Natco Pharma Ltd.

    Het meest populaire farmaceutische bedrijf is Natco Pharma Ltd., wiens medicijnen het leven hebben gered van verschillende tienduizenden mensen met chronische hepatitis C. Ze heeft de productie van vrijwel de gehele lijn van direct werkende antivirale geneesmiddelen onder de knie, waaronder sofosbuvir met daclatasvir en ledipasvir met velpatasvir. Natco Pharma verscheen in 1981 in Hyderabad met een startkapitaal van 3,3 miljoen roepies, vervolgens was het aantal werknemers 20 personen. Nu zijn er in India 3,5 duizend mensen die werken bij vijf Natco-bedrijven en er zijn ook vestigingen in andere landen. Naast de productie-eenheden beschikt het bedrijf over goed uitgeruste laboratoria die het mogelijk maken moderne medische preparaten te ontwikkelen. Onder haar eigen ontwikkelingen is het de moeite waard om medicijnen te gebruiken om kanker te bestrijden. Een van de bekendste medicijnen op dit gebied, is Veenat, vervaardigd sinds 2003 en gebruikt voor leukemie. Ja, en de introductie van generieke geneesmiddelen voor de behandeling van het hepatitis C-virus is een prioriteit voor Natco.

    Hetero Drugs Ltd.

    Dit bedrijf heeft als doel het produceren van generieke geneesmiddelen, waarbij dit streven wordt ondergeschikt gemaakt aan zijn eigen netwerk van industrieën, waaronder fabrieken met vestigingen en laboratoria. Het productienetwerk van Hetero is aangescherpt voor de productie van geneesmiddelen onder licentie verkregen door het bedrijf. Een van haar activiteiten is medische voorbereidingen die het mogelijk maken om serieuze virale ziekten te bestrijden, waarvan de behandeling voor veel patiënten onmogelijk is geworden vanwege de hoge kosten van originele geneesmiddelen. Met de verkregen licentie kan Hetero snel overgaan tot de introductie van generieke geneesmiddelen die vervolgens voor een betaalbare prijs voor patiënten worden verkocht. De oprichting van Hetero Drugs gaat terug tot 1993. In de afgelopen 24 jaar zijn een tiental fabrieken en enkele tientallen productie-eenheden in India verschenen. Door de aanwezigheid van eigen laboratoria kan het bedrijf experimenteel werken aan de synthese van stoffen, wat heeft bijgedragen aan de uitbreiding van de productiebasis en de actieve uitvoer van drugs naar het buitenland.

    Zydus heptiza

    Zydus is een Indiaas bedrijf dat zichzelf tot doel heeft gesteld om een ​​gezonde samenleving op te bouwen, die volgens de eigenaren zal worden gevolgd door een verandering ten goede in de kwaliteit van het leven van mensen. Het doel is nobel en daarom voert het bedrijf actieve educatieve activiteiten uit die betrekking hebben op de armste delen van de bevolking. Inclusief door gratis vaccinatie van de bevolking tegen hepatitis B. Zidus in termen van productievolumes in de Indiase farmaceutische markt staat op de vierde plaats. Bovendien stonden 16 van de geneesmiddelen op de lijst van 300 belangrijkste geneesmiddelen van de Indiase farmaceutische industrie. Zydus-producten zijn niet alleen op de binnenlandse markt in trek, ze zijn ook te vinden in apotheken in 43 landen van onze planeet. En het scala aan medicijnen dat bij 7 bedrijven wordt geproduceerd, overtreft 850 medicijnen. Een van de meest krachtige industrieën is in de staat Gujarat en is een van de grootste, niet alleen in India, maar ook in Azië.

    HCV-therapie 2017

    Hepatitis C-behandelingsregimes voor elke patiënt worden individueel door de arts gekozen. Voor een juiste, effectieve en veilige selectie van het schema moet de arts weten:

    • virus genotype
    • duur van de ziekte,
    • de mate van leverschade,
    • aanwezigheid / afwezigheid van cirrose, gelijktijdige infectie (bijvoorbeeld HIV of andere hepatitis), negatieve ervaring met eerdere behandeling.

    Na ontvangst van deze gegevens na de analysecyclus, selecteert de arts de optimale behandelingsoptie op basis van de aanbevelingen van de EASL. De EASL-aanbevelingen worden van jaar tot jaar aangepast, ze voegen de nieuwe geneesmiddelen toe. Alvorens nieuwe behandelingsopties aan te bevelen, worden ze gepresenteerd voor overweging door het Congres of een speciale vergadering. In 2017 heeft de speciale EASL-bijeenkomst updates van aanbevolen schema's in Parijs besproken. Er werd besloten om de interferontherapie in Europa voor de behandeling van HCV volledig stop te zetten. Bovendien was er geen enkele aanbevolen behandeling met een enkel, direct werkend medicijn. Hier zijn enkele aanbevolen behandelingsopties. Ze worden allemaal alleen voor kennismaking gegeven en kunnen geen leidraad voor actie worden, omdat alleen een arts een recept voor therapie kan geven, onder toezicht waarvan ze het later zal ondergaan.

    1. Mogelijke behandelingsschema's voorgesteld door EASL in het geval van hepatitis C mono-infectie of co-infectie met HIV + HCV bij patiënten zonder cirrose en niet eerder behandeld:
    • voor de behandeling van genotypen la en lb, kunt u gebruiken:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, zonder ribavirine, duur 29 weken, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, ook zonder ribavirine, behandelingsperiode van 29 weken, # 8229, of sofosbuvir + velpatasvir zonder ribavirine, de duur van de cursus is 29 weken.

    • bij de behandeling van genotype 2 wordt gedurende 29 weken zonder ribavirine gebruikt:

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir, # 8229, of sofosbuvir + velpatasvir.

    • bij de behandeling van genotype 3 zonder het gebruik van ribavirine met een behandelingsperiode van 29 weken, gebruik:

    # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229, of sofosbuvir + velpatasvir.

    • tijdens de behandeling van genotype 4 is het mogelijk om gedurende 29 weken riboton aan te brengen zonder ribavirine:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229, of sofosbuvir + velpatasvir.

    1. Aanbevolen EASL-behandelingsregimes voor hepatitis C-mono-infectie of gelijktijdige HIV / HCV-infectie bij patiënten met gecompenseerde cirrose die niet eerder zijn behandeld:
    • voor de behandeling van genotypen la en lb, kunt u gebruiken:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir met ribavirine, duur 29 weken, # 8229, of 24 weken zonder ribavirine, # 8229, en een andere optie - 24 weken met ribavirine met een ongunstige prognose van respons, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, als zonder ribavirine, daarna 24 weken en met ribavirine, de behandelingsperiode 29 weken is, # 8229, of sofosbuvir + velpatasvir zonder ribavirine, 29 weken.

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir zonder ribavirine duurt 29 weken en met ribavirine, met een ongunstige prognose - 24 weken, # 8229, of sofosbuvir + velpatasvir zonder combinatie met ribavirine gedurende 29 weken.

    # 8229, sofosbuvir + daclatasvir gedurende 24 weken met ribavirine, # 8229, of sofosbuvir + velpatasvir opnieuw met ribavirine, de behandelingsperiode is 29 weken, # 8229, sofosbuvir + velpatasvir is mogelijk als optie gedurende 24 weken, maar zonder ribavirine.

    • Bij de behandeling van genotype 4 worden dezelfde regimes gebruikt als in genotypes la en 1b.

    Zoals u kunt zien, beïnvloedt de combinatie van voorgeschreven geneesmiddelen, gekozen door de arts, naast de toestand van de patiënt en de kenmerken van zijn lichaam, ook het resultaat van de therapie. Bovendien hangt de duur van de behandeling af van de combinatie gekozen door de arts.

    Behandeling met moderne HCV-geneesmiddelen

    Neem één keer per dag oraal pillen van geneesmiddelen die direct door een arts worden voorgeschreven. Ze zijn niet verdeeld in delen, niet kauwen, maar weggespoeld met gewoon water. Het is het beste om dit tegelijkertijd te doen, omdat een constante concentratie van actieve stoffen in het lichaam wordt gehandhaafd. Het is niet nodig om gehecht te raken aan de data van voedselinname, het belangrijkste is om het niet op een lege maag te doen. Wanneer u begint met het innemen van medicijnen, let dan op uw welzijn, want tijdens deze periode is het het gemakkelijkst om eventuele bijwerkingen op te merken. De PPPP's zelf hebben er niet veel van, terwijl de medicijnen die in het complex worden voorgeschreven veel kleiner zijn. Meestal verschijnen bijwerkingen als:

    • hoofdpijn
    • braken en duizeligheid,
    • algemene zwakte
    • verlies van eetlust
    • gewrichtspijn,
    • veranderingen in bloed biochemische parameters, uitgedrukt in lage hemoglobinespiegels, afname van bloedplaatjes en lymfocyten.

    Bijwerkingen zijn mogelijk bij een klein aantal patiënten. Maar toch moet over alle gemelde aandoeningen de behandelende arts worden geïnformeerd voor het nemen van de nodige maatregelen. Om verhoogde bijwerkingen te voorkomen, dienen alcohol en nicotine van het gebruik te worden uitgesloten, omdat ze de lever nadelig beïnvloeden.

    Contra

    In sommige gevallen is de ontvangst van DAA's uitgesloten, het betreft:

    • individuele overgevoeligheid van patiënten voor bepaalde ingrediënten van geneesmiddelen,
    • patiënten jonger dan 18 jaar, omdat er geen nauwkeurige gegevens zijn over hun effecten op het lichaam,
    • vrouwen die de foetus en borstvoeding gevende baby's dragen,
    • vrouwen moeten betrouwbare anticonceptiemethoden gebruiken om conceptie tijdens de behandelingsperiode te vermijden. Bovendien is deze vereiste ook van toepassing op vrouwen van wie de partners ook DAA-therapie ontvangen.

    Bewaar antivirale middelen voor directe actie op plaatsen die niet toegankelijk zijn voor kinderen en de werking van direct zonlicht. De opslagtemperatuur moet binnen het bereik van 15 ÷ 30 ºС liggen. Begin met het innemen van medicijnen, controleer de productie- en opslagdatums die op de verpakking staan ​​vermeld. Achterstallige medicijnen zijn verboden. Hoe DAA's te verkrijgen voor de burgers van Rusland Helaas zijn Indiase generieke geneesmiddelen niet te vinden in Russische apotheken. Het farmaceutische bedrijf Gilead, dat vergunningen verstrekt voor het vrijgeven van drugs, verbood voorzichtig hun export naar veel landen. Waaronder in alle Europese staten. Degenen die low-cost Indiase generieke medicijnen willen kopen om hepatitis C te bestrijden, kunnen op verschillende manieren profiteren van:

    • bestel ze via Russische online apotheken en ontvang de goederen binnen een paar uur (of dagen), afhankelijk van de plaats van levering. En in de meeste gevallen is zelfs de vooruitbetaling niet vereist,
    • bestel ze via Indiase online winkels met levering aan huis. Hier heeft u een vooruitbetaling in vreemde valuta nodig en de wachttijd is drie weken tot een maand. Bovendien is de noodzaak om in het Engels met de verkoper te communiceren toegevoegd,
    • ga naar India en breng het medicijn zelf. Het kost ook tijd, plus een taalbarrière, plus de moeilijkheid om de originaliteit van de gekochte goederen bij de apotheek te controleren. Aan dit alles zal het probleem van zelfexport worden toegevoegd, dat een thermisch reservoir, beschikbaarheid van een artsenoordeel en een recept in het Engels vereist, evenals een kopie van de cheque.

    Geïnteresseerd in het kopen van medicijnen, bepalen mensen zelf welke van de mogelijke bezorgopties ze kiezen. Vergeet niet dat in het geval van HCV, een gunstige uitkomst van de therapie afhangt van de snelheid van het begin. Hier, in letterlijke zin, is de vertraging van de dood als, en daarom zou je het begin van de procedure niet moeten uitstellen.

  • Volgende Artikel

    Hepatitis bij varkens