Bloedonderzoek voor wat het is

Diëten

Tandem-massaspectrometrie (TMS) is een van de moderne methoden voor het analyseren van verbindingen, die op grote schaal wordt gebruikt voor verschillende wetenschappelijke en praktische doeleinden. Deze methode maakt de analyse mogelijk van enkele honderden verbindingen in sporenhoeveelheden biologisch materiaal.

Waar is deze methode van toepassing?

In de wereldpraktijk van de volksgezondheid wordt deze methode gebruikt voor massascreening van pasgeborenen op erfelijke stofwisselingsziekten (NBO). Op de plaats van gedroogd bloed is de bepaling van aminozuren (waaronder fenylalanine) en acyl carnitines mogelijk. Kwantitatieve bepaling van deze stoffen maakt het mogelijk tientallen erfelijke ziekten uit te sluiten die behoren tot verschillende klassen van NBO (stoornissen van het metabolisme van aminozuren, organische zuren en defecten van mitochondriale P-oxidatie van vetzuren). Volgens gegevens uit buitenlandse literatuur is hun totale frequentie 1: 2000 levende pasgeborenen. Eerder vereiste de diagnose van deze aandoeningen een grote hoeveelheid biologisch materiaal, verschillende onderzoeken (aminozuuranalyse, gaschromatografie / massaspectrometrie, bepaling van het spectrum van acylcarnitines), hetgeen aanzienlijke tijd- en materiaalkosten vereiste. Met TMS kunt u al deze verbindingen in één analyse kwantificeren!

Welke ziekten kunnen met deze methode worden gedetecteerd?

Helaas bestaat er nog geen universele, zeer gevoelige en specifieke test voor het diagnosticeren van alle bekende NBO's, maar technologieën die zijn gericht op het identificeren van enkele tientallen en zelfs honderden ziekten in één analyse, worden al realiteit. Deze methoden omvatten TMS. Deze methode maakt het mogelijk met een hoge betrouwbaarheid ongeveer 40 erfelijke metabolische stoornissen van aminozuren, organische zuren en defecten van mitochondriale beta-oxidatie van vetzuren te detecteren. De meeste van deze ziekten komen voor in de neonatale periode. De lijst met ziekten die met deze technologie kunnen worden gediagnosticeerd, wordt gegeven in de analysesectie http://labnbo.ru/prajs-list

Waarom is het nodig om stofwisselingsziekten zo vroeg mogelijk te diagnosticeren?

Veel artsen geloven ten onrechte dat NBO's zo zeldzaam zijn dat ze alleen als laatste moeten worden uitgesloten en dat de juiste diagnose vaak al in de latere stadia wordt vastgesteld of dat de ziekte helemaal niet wordt gediagnosticeerd.

Er zijn echter al meer dan 150 vormen van NBO's bekend waarvoor effectieve therapeutische methoden zijn ontwikkeld en het leven en de gezondheid van een patiënt grotendeels afhangen van hoe snel en correct een diagnose wordt gesteld. Voor 20 ziekten die met TMS kunnen worden gediagnosticeerd, is een speciale behandeling ontwikkeld. Gediagnosticeerd op tijdbesparend leven en de gezondheid van de patiënt!

Regels voor het verzamelen van bloedmonsters

Bloed wordt verzameld op een standaard filterkaart (nr. 903), die wordt gebruikt voor het screenen van pasgeborenen op PKU. Bloed kan zowel capillair (van een vinger, hiel) of veneus zijn. Het geselecteerde gebied moet goed op het filter worden verzadigd! Op de filterkaart moet duidelijk de naam worden vermeld, van wie en van waar de patiënt, geboortedatum en telefoonnummer van de behandelende arts zijn verzonden. Het monster wordt 2-3 uur aan de lucht gedroogd. Het is raadzaam om een ​​uittreksel uit de geschiedenis bij te voegen.

Een voorbeeld van een juiste bloedafname:

Voorbeelden van abnormale bloedafname:

Veel kleine stippen

Het monster was niet volledig gedroogd, waardoor een monster vaag werd tijdens transport.

Het filterpapier was slecht gedrenkt in bloed.

Handige links:

(NCBI) is een nationale informatiebron over moleculaire biologie, opgericht in 1988. De PubMed-database bevat meer dan 15.000.000 artikelen uit verschillende biomedische tijdschriften (in het Engels).

Een catalogus van menselijke genen en genetische ziekten, gecreëerd door Dr. V.A. McKusick en zijn collega's (in het Engels).

(SSIEM) - Maatschappij voor de studie van erfelijke stofwisselingsziekten (aangeboren metabole fouten).

Federale staatsbegrotingswetenschappelijke instelling "Centrum voor medische genetica"

Informatieportaal over zeldzame ziekten, de mogelijkheden van hun behandeling en diagnose voor patiënten met zeldzame ziekten

De All-Russian Society of Rare Diseases werd in 2012 opgericht op initiatief van patiënten, hun families en experts. Vandaag verenigt de WHO-organisatie meer dan 400 patiënten uit 47 regio's van de Russische Federatie met 63 zeldzame ziekten.

Bloedonderzoek voor wat het is

Gedurende vele jaren werd screening voornamelijk uitgevoerd met testen die specifiek zijn voor elke afzonderlijke ziekte. De screening van PKU was bijvoorbeeld gebaseerd op een microbiologische of chemische evaluatie van de toename van fenylalanine.

Deze situatie is het afgelopen decennium volledig veranderd met de komst van tandem massaspectrometrie (TMS) technologie. Een analyse van tandem-massaspectrometrie (TMS) kan niet alleen accuraat en snel verhoogde fenylalanine in een bloedkleuring in een pasgeborene met minder vals-positieve reacties onthullen in vergelijking met oude methoden, maar laat ook toe dat tientallen andere biochemische stoornissen worden gedetecteerd.

Sommigen van hen zijn al gescreend met individuele tests. Vele staten gebruikten bijvoorbeeld specifieke tests om methionine-elevatie te detecteren om Tandem Massaspectrometrie (TMS) te detecteren. Ze bleken ook een betrouwbare methode voor niet-onatale screening van bepaalde ziekten die voldeden aan de screeningcriteria, maar hadden geen eerder betrouwbare test.

MCAD-deficiëntie is bijvoorbeeld een ziekte van vetzuuroxidatie, gewoonlijk asymptomatisch, maar klinisch detecteerbaar wanneer een patiënt katabolisme verhoogt. Detectie van MCAD-deficiëntie bij de geboorte kan van vitaal belang zijn, omdat zieke kinderen een zeer hoog risico op levensbedreigende hypoglycemie hebben in de vroege kindertijd met katabole aandoeningen veroorzaakt door intercurrente ziekten, zoals een virale infectie.

Bijna een kwart van de kinderen met niet-gediagnosticeerde MCAD-deficiëntie sterft bij de eerste episode van hypoglykemie. Met de juiste behandeling kan de stofwisselingsstoornis worden gestopt. Wanneer MCAD ontoereikend is, is het primaire doel van screening om ouders en artsen te waarschuwen voor het risico van metabole decompensatie, aangezien kinderen tussen aanvallen praktisch gezond zijn en geen dagelijkse behandeling nodig hebben, met uitzondering van langdurig vasten.

Het gebruik van tandem-massaspectrometrie (TMS) voor neonatale screening blijft echter in het geding. Naast het leveren van snelle testen van vele aandoeningen, neonatale screening op dat al gedaan of zou kunnen worden gerechtvaardigd, tandem massaspectrometrie (TMS) identificeert ook baby's met aangeboren stofwisselingsziekten zoals methylmalon acidemie, zijn meestal niet opgenomen in het bevolkingsonderzoek vanwege hun zeldzaamheid en de moeilijkheid van het verstrekken een laatste therapie die beschermt tegen progressieve neurologische achteruitgang.

Ziekten gedetecteerd door tandem-massaspectrometrie

I. Aminoacidemia:
- PKU
- Ziekte van urine met ahornsiroop
- homocystinurie
- Tsitrullinemiya
- Arginine suikerachtige acidurie
- Tyrosinemie type I

II. Organische acidemie:
- Propionzuur-acidemie
- Methylmalonic Acidemia
- Isovaleriaire acidemie
- Geïsoleerde 3-methyl-crotonyl-glycinemie
- Glutaarzuuracidemie (type I)
- Mitochondriale acetoacetyl-coA-thiolasedeficiëntie
- Hydroxymethylglutaarzuuracidemie
- Het falen van veel coA-carboxylase

III. Overtredingen van vetzuuroxidatie:
- SCAD-fout
- Hydroxy-deficiëntie scad
- MCAD mislukt
- VLCAD-fout
- LCAD-deficiëntie en trifunctionele eiwitdeficiëntie
- Glutaarzuuracidemie type II
- Carnitine palmitoyltransferase II-tekort

Tandem-massaspectrometrie (TMS) kan ook abnormale metabolieten met een onbepaalde gezondheidswaarde identificeren. SCAD-deficiëntie is bijvoorbeeld een andere vetzuuroxidatieziekte, meestal asymptomatisch, hoewel sommige patiënten problemen kunnen hebben met episodische hypoglycemie. De voorspellende waarde van een positieve tandem massaspectrometrie (TMS) analyse voor symptomatische SCAD is dus waarschijnlijk erg laag.

Is het voordeel van het detecteren van SCAD-deficiëntie groter dan het negatieve effect van de test, die ongerechtvaardigde ouderlijke angst veroorzaakt, voor de meerderheid van de pasgeborenen met een positief testresultaat dat nooit klinische symptomen vertoonde? Derhalve voldoet niet elke ziekte die wordt gedetecteerd door tandem-massaspectrometrie (TMS) aan de criteria voor neonatale screening.

Dat is de reden waarom sommige experts in het gezondheidszorgsysteem stellen dat ouders en artsen alleen verteld hoeven te worden over afwijkingen in metabolieten met bewezen klinische voordelen. Anderen pleiten voor het gebruik van alle informatie die wordt verstrekt door tandem-massaspectrometrie (TMS) en stellen voor om ouders en artsen te informeren over alle abnormale metabolieten, ongeacht hoe goed de ziekte voldoet aan de standaardcriteria voor neonatale screening. In de toekomst kunt u patiënten met anomalieën van onbekende waarde zorgvuldig bewaken. Om al deze redenen blijft het gebruik van tandem-massaspectrometrie (TMS) voor het screenen van pasgeborenen onderwerp van discussie.

Voor bevolkingsonderzoek in de prenatale periode worden meestal twee tests gebruikt: chromosomale analyse bij oudere vrouwen en AFP-maternaal serum of een drievoudige test voor DNT en chromosomale aneuploïdie.

Als de zwangerschap in gevaar is te wijten aan in - invasieve procedures voor prenatale diagnose van chromosomale aneuploïdieën te wijten aan leeftijd van de moeder, moet ook bieden extra inspecties, bijvoorbeeld de bepaling van AFP-niveaus in het vruchtwater, genoom-vergelijkende hybridisatie om te zoeken naar gevaarlijke submicroscopische deleties, mutaties screening op cystic fibrosis en andere veel voorkomende kwalen.

Bloedonderzoek voor wat het is

Tandem-massaspectrometrie is een van de moderne methoden voor het analyseren van verbindingen, die op grote schaal wordt gebruikt voor verschillende wetenschappelijke en praktische doeleinden. Deze methode maakt de analyse mogelijk van enkele honderden verbindingen in sporenhoeveelheden biologisch materiaal. In de wereldpraktijk van volksgezondheid wordt deze methode gebruikt voor massascreening van pasgeborenen op erfelijke stofwisselingsziekten (NBO). Op de plaats van gedroogd bloed is de bepaling van aminozuren (waaronder fenylalanine) en acyl carnitines mogelijk. Kwantitatieve bepaling van deze stoffen maakt het mogelijk tientallen erfelijke ziekten uit te sluiten die behoren tot verschillende klassen van NBO (stoornissen van het metabolisme van aminozuren, organische zuren en defecten van mitochondriale b-oxidatie van vetzuren). Eerder vereiste de diagnose van deze aandoeningen een grote hoeveelheid biologisch materiaal, verschillende onderzoeken (aminozuuranalyse, gaschromatografie / massaspectrometrie, bepaling van het spectrum van acylcarnitines), hetgeen aanzienlijke tijd- en materiaalkosten vereiste. Met TMS kunt u al deze verbindingen in één analyse kwantificeren! Erfelijke aandoeningen van het metabolisme van aminozuren, organische zuren en defecten van mitochondriale beta-oxidatie van vetzuren omvatten ongeveer 100 nosologische vormen, waarvan de meeste zich manifesteren in de neonatale periode. Hun frequentie is meer dan 1: 5000 levende pasgeborenen. Veel artsen geloven ten onrechte dat ziekten van deze groep zo zeldzaam zijn dat ze alleen als laatste moeten worden uitgesloten, en heel vaak wordt de juiste diagnose al in de latere stadia vastgesteld of wordt de ziekte helemaal niet gediagnosticeerd.

Tijdens de analyse worden 52 indicatoren bepaald (aminozuren en acyl carnines)

Testmateriaal: capillair bloed in droge vorm

Voorbereiding voor de studie: nee

Ontvangstdagen: tijdens de openingsuren van het medisch centrum

№ НБО1, Screening van pasgeborenen. "PINGULUS" (analyse van het spectrum van aminozuren en acyl carnitines)

  • Vergelijkbare gevallen van ziekte in het gezin.
  • Gevallen van plotselinge sterfte van een kind op jonge leeftijd in het gezin.
  • Een sterke verslechtering van de conditie van het kind na een korte periode van normale ontwikkeling (een asymptomatische periode kan variëren van enkele uren tot meerdere weken).
  • Ongebruikelijke lichaams- en / of urinegeur ("zoet", "muis", "gekookte kool", "zweterige benen", enz.).
  • Neurologische aandoeningen - bewustzijnsstoornissen (lethargie, coma), verschillende soorten convulsieve aanvallen, veranderingen in de spiertonus (spierhypotonie of spastische tetraparese).
  • Aandoeningen van het ademhalingsritme (bradypnea, tachypnea, apneu).
  • Verstoringen van andere organen en systemen (leverschade, hepatosplenomegalie, cardiomyopathie, retinopathie).
  • Veranderingen in laboratoriumparameters van bloed en urine - neutropenie, bloedarmoede, metabole acidose / alkalose, hypoglycemie / hyperglycemie, verhoogde activiteit van leverenzymen en het niveau van creatinefosfokinase, ketonurie.
  • Aanvullende diagnostiek van 37 erfelijke stofwisselingsziekten samen met het verplichte staatsprogramma voor de detectie van 5 erfelijke ziekten: screening van pasgeborenen: "PECHET".

Interpretatie van onderzoeksresultaten bevat informatie voor de behandelende arts en is geen diagnose. De informatie in dit gedeelte kan niet worden gebruikt voor zelfdiagnose en zelfbehandeling. Een nauwkeurige diagnose wordt gesteld door de arts, waarbij zowel de resultaten van dit onderzoek als de nodige informatie uit andere bronnen worden gebruikt: anamnese, resultaten van andere onderzoeken, enz.

Maateenheden in het laboratorium INVITRO: μmol / liter.

LABORATORIUM VAN ERKEND ZIEKTESTOFFEN

Indicaties voor de analyse van TMS

De klinische diagnose van congenitale metabole stoornissen van aminozuren, organische zuren en defecten van mitochondriale b-oxidatie kan moeilijk zijn, omdat deze ziekten geen specifieke specifieke tekenen en symptomen hebben. Dat is de reden waarom de studie van alle patiënten van de afdeling pathologie van pasgeborenen, intensive care-afdelingen voor kinderen kan helpen bij de snelle detectie van deze erfelijke ziekten.

De indicaties voor de studie van acyl carnitines en aminozuren volgens de TMS-methode zijn:


7. Veranderingen in bloed- en urineparameters - trombocytopenie, neutropenie, bloedarmoede, metabole acidose / alkalose, hypoglykemie / hyperglycemie, verhoogde leverenzymen en creatinefosfokinasegehalte, ketonurie.

Genetische analyses

Meisjes, de neuropatholoog, verwees ons naar genetica (ze zei dat hersenverlamming niet onze diagnose is, hoewel ze de behandeling toch naar het sanatorium bracht). Vertel eens, wie is dit tegengekomen, hoeveel is ongeveer? Ik weet nog steeds niet waar we naartoe worden gestuurd, maar ik zou graag willen weten voor welke bedragen ik me moet voorbereiden, dit is geen algemene bloedtest...

Mobiele applicatie "Happy Mama" 4.7 Communiceren in de applicatie is veel handiger!

Ik kan niet zeggen. alles kan zijn. en alles is anders

We hebben veel dingen gegeven! Karyotype 4.000 roebel, TMS 4.000 roebel, urine-aminozuren 4 keer (10.000 roebel voor iedereen), bloed-aminozuren 4 keer ook ongeveer 10.000 roebel, Dravesyndroom 12.000 roebel, lactaat vele malen, consulten zelf zijn geen goedkope genetica en veel meer " trivia. "Genetische screening is niet goedkoop!

Multi-steroïde bloedtest: definitie van vitale menselijke hormonen op een kwalitatief nieuw niveau

De term "multi-steroïde analyse" verwijst naar de bepaling van het profiel van steroïde hormonen door middel van gaschromatografie-massaspectrometrie. De totaliteit van de resultaten van deze analyse wordt aangeduid met de term "steroïdeprofiel". In essentie zijn dit twee equivalente termen voor hetzelfde.

Multisteroid-analyse is een thuisontwikkeling, de analysemethode is gevalideerd en gecertificeerd als "Methode (methode) voor het meten van de massaconcentratie van steroïdhormonen in bloedmonsters met behulp van vloeistofchromatografie - tandem-massaspectrometrie MU 08-47 / 376", geregistreerd in het ROSSTANDART-register onder het RF-nummer.1.31.2015.21875.

Momenteel is multi-steroïdenanalyse niet opgenomen in de lijst met tests die is goedgekeurd door het ministerie van Volksgezondheid van de Russische Federatie en wordt uitgevoerd als onderdeel van een wetenschappelijk onderzoek. Patiënten moeten zelf de kosten van deze analyse betalen. Er wordt hard aan gewerkt om ervoor te zorgen dat deze uitgaven in de toekomst worden gedekt door verzekeringsgeneesmiddelen.

Kwantitatieve bepaling van de belangrijkste steroïdhormonen en hun metabolieten in serum of speekselvloeistof volgens de referentiemethode - tandemchromatografie - massaspectrometrie (in de wetenschappelijke literatuur wordt deze methode ook wel LC-MS / MS genoemd) is een tijdrovende en dure procedure. Het belangrijkste kenmerk van de werkwijze is het vermogen om alle verklaarde analyten in de loop van een enkele analyse te bepalen (Figuur 1), daarom worden, in termen van één analyt, de kosten van bepaling bijna minder verkregen dan met alternatieve immunochemische werkwijzen.

Figuur 1. Analyten, bepaald in de loop van een enkele analyse, volgens de methode

Waarom is de naam van het biomateriaal "bloed" in de naam van de techniek?

Om onmiddellijk het verschil met de bekende analyse "steroid urine-profiel" te identificeren. Opgemerkt moet worden dat de informatie-inhoud van de urine-analyse compleet anders is en een andere interpretatie vereist, omdat de urine voornamelijk inactieve vormen van steroïden bevat: sulfaten, glucuroniden en gehydroxyleerde derivaten, die al onnodig voor het lichaam zijn en daarvan zijn afgeleid. In het bloed worden concentraties van actieve vormen van steroïde hormonen die in het algemene bloedtoevoersysteem circuleren, de cellen binnenkomen en een signaaleffect hebben op het genoom bepaald.

Onder welke medische omstandigheden wordt de bepaling van het steroïdebloedprofiel weergegeven, welke artsen zullen het steroïdebloedprofiel helpen bij de diagnose?

1. Verschillende vormen van aangeboren disfunctie van de bijnierschors (VDCN). VDCH is een aangeboren ziekte, gemanifesteerd in overtreding van de biosynthese van steroïden. Het wordt veroorzaakt door disfunctie van een van de 5 enzymen van de bijnierschors. Dit kan een tekort aan 21a-hydroxylase (CYP21) of 11b-hydroxylase (CYP11B1) zijn. Traditionele screening van pasgeborenen op HBRA door immunoassay geeft vaak vals positieve resultaten bij het bepalen van 17-hydroxyprogesteron. Daarom is in alle betwistbare gevallen confirmatieve diagnostiek door de LC-MS / MS-methode noodzakelijk [1]. Het diagnosticeren van een niet-klassieke vorm VDKN (NF VDKN) door immunochemische methoden is een significante moeilijkheid, daarom wordt NF VDKN vaak niet gediagnosticeerd tijdens neonatale screening, maar voelt het zich als volgt: adolescenten ontwikkelen voortijdig lichaamshaar, acne; bij meisjes, hirsutisme, menstruatieproblemen en stoornissen in de voortplanting. Een toename van 21-deoxycortisol en 17-OH-progesteron is kenmerkend voor het steroïdeprofiel in NF VDKN, daarom is een multi-steroïde analyse in combinatie met genetische testen uitermate nuttig voor het diagnosticeren van deze ziekte.

2. Bijnierinsufficiëntie. Hiervoor wordt een stimulatietest met ACTH uitgevoerd en worden de niveaus cortisol, aldosteron en 11-deoxycortisol gemeten: basaal, 30 en 60 minuten na stimulatie. Bij primaire bijnierinsufficiëntie reageert aldosteron niet op stimulatie, terwijl bij secundaire insufficiëntie een toename van het niveau wordt geregistreerd. In de controlegroep nam het niveau van 11-deoxycortisol 15-20 keer toe als reactie op stimulatie van ACTH en cortisol steeg ongeveer 3 keer [2].

3. Hypogonadisme bij mannen. De juiste diagnose van hypogonadisme bij mannen vereist de bepaling van het exacte niveau van totaal testosteron (TT) met behulp van massaspectrometrie. In een onderzoek met 10.000 vrijwilligers werd vastgesteld dat hypogonadisme kan worden gediagnosticeerd als de TT-concentratie lager is dan 12,1 nmol / l volgens massaspectrometrie [3].

4. Behandeling van substitutietherapie bij mannen en vrouwen (HST). Voor deze categorie patiënten is massaspectrometrie de "gouden standaard", omdat u hiermee de juiste therapeutische dosis van het hormoon (of stimulerend middel) kunt kiezen, in detail de respons van alle metabolieten op vervangende therapie kunt volgen en interferentie met immunochemische methoden kunt voorkomen [4-6].

5. Het is erg belangrijk om de steroidhormonen tijdens de zwangerschap en gedurende een jaar na de bevalling te controleren. Multi-steroïdale analyse geeft veel nauwkeuriger informatie over de androgene status vergeleken met traditioneel DHEA-sulfaat.

6. Gynaecologie. Viriliserende (androgeenproducerende) tumoren van de bijnieren bezitten androgeen producerende activiteit en veroorzaken de ontwikkeling van het virale syndroom bij vrouwen. Er is vastgesteld dat vrijwel elke hormonaal actieve ovariumtumor een bron van overmatige productie van androgenen en / of oestrogenen kan zijn en moet worden gediagnosticeerd met behulp van de tandem massaspectrometrische methode [7].

7. Diabetes. Deze ziekte beïnvloedt het zenuwstelsel en beïnvloedt de concentratie van neurosteroïden. LC-MS / MS maakt het mogelijk om de concentratie van neuroactieve steroïden te bepalen om nieuwe benaderingen te ontwikkelen voor de behandeling van diabetische nefropathie [8].

8. Sportgeneeskunde. Het steroïdprofiel bij sporters in het bloed en in speeksel kan belangrijke informatie geven over hun gezondheid, conditie en controle over het verloop van de training vanwege de optimale verdeling van de belastingen.

Multi-steroïde analyse maakt het moeilijk om een ​​plek voor zichzelf te maken in het leven, rekening houdend met het wijdverspreide gebruik van immunoassay-methoden en weerstand van aanhangers van traditionele technologieën. Maar achter deze methode ligt de toekomst, het wordt al erkend als de beste vertegenwoordiger van de medische wetenschap [9].

Wat is ALS

Amyotrofische laterale sclerose is de meest voorkomende vorm van motorneuronziekte, een neurodegeneratieve aandoening die motorneuronen in de hersenen en het ruggenmerg aantast.

Diagnose van ALS

De symptomen van ALS kunnen van persoon tot persoon verschillen, omdat de ziekte een individueel karakter heeft en de snelheid van progressie.

Amyotrofische laterale sclerose is om verschillende redenen buitengewoon moeilijk te diagnosticeren:

  • dit is een zeldzame ziekte;
  • vroege symptomen zijn tamelijk mild, zoals onhandigheid, onhandigheid in de handen of een enigszins vermoeide taal, die allemaal het resultaat kunnen zijn van totaal verschillende redenen;
  • de ziekte treft elke persoon op verschillende manieren, er is geen duidelijk symptoom dat duidelijk ALS definieert.

Als de therapeut het vermoeden heeft dat hij of zij een ALS-patiënt heeft, moet hij hem doorverwijzen naar een neuroloog. Dan kan een persoon een reeks diagnostische onderzoeken hebben die zowel op poliklinische basis als op de intramurale afdeling kunnen worden uitgevoerd.

Bloedonderzoek

Studies zullen aantonen of creatine kinase niveaus verhoogd zijn in het bloed. Dit enzym wordt geproduceerd wanneer spierweefsel wordt vernietigd en het niveau ervan kan worden verhoogd bij mensen met ALS. Maar deze indicator is geen specifiek teken van ALS, omdat het een indicator kan zijn van andere ziekten.

Electroneuromyography (ENMG)

Met ENMG worden dunne naalden gebruikt om zenuwimpulsen in individuele spieren te registreren. Het opnemen gebeurt meestal vanuit elke ledemaat en bulbaire (faryngeale) spieren. Spieren die hun innervatie zijn kwijtgeraakt, worden gevonden omdat hun elektrische activiteit verschilt van de activiteit van gezonde spieren. De resultaten van ENMG kunnen afwijken van de norm, zelfs als een bepaalde spier nog niet door de ziekte is aangetast.

Wanneer ENMG de snelheid van de impuls langs de zenuwvezels controleert. Om dit te doen, wordt een kleine impuls door een kleine pakking in contact met de huid gepasseerd. Dit is een zeer belangrijke diagnostische methode voor onderzoek.

Transcraniële magnetische stimulatie (TMS)

Dit is een nieuwe methode die gelijktijdig met ENMG kan worden uitgevoerd. Het is ontworpen om de toestand van de motorneuronen van de hersenen te beoordelen. TMS-resultaten kunnen helpen bij het stellen van een diagnose.

Magnetic Resonance Imaging (MRI)

MRT kan schade aan het zenuwstelsel detecteren die wordt veroorzaakt door een beroerte, de ziekte van Alzheimer, de ziekte van Parkinson, multiple sclerose, tumoren en letsels van het ruggenmerg en de hersenen. MRT onthult geen specifieke veranderingen in ALS, omdat de schade veroorzaakt door deze ziekte de beelden niet beïnvloedt. Deze onderzoeksmethode wordt gebruikt om ziekten met ALS-achtige symptomen uit te sluiten.

Andere methoden

De neuroloog kan besluiten aanvullende onderzoeken uit te voeren, zoals lumbaalpunctie of spierbiopsie, als iets op hun behoefte wijst. Maar deze tests worden niet altijd gebruikt bij de diagnose van ALS.

Tandem toepassing
massaspectrometrie (HPLC-MSMS)
in klinische diagnose

Massaspectrometrie is het vooruitzicht voor de ontwikkeling van klinische chemie, de toekomst waarin een revolutie in de klinische diagnostiek zal leiden tot het wijdverbreide gebruik van massaspectrometrie.
(Michael Ulerich, Departement Klinische Chemie, Georg-August University, Göttingen, Duitsland)

Volgens een recensie gepubliceerd in Clinical Biochemist Reviews, is het gebruik van hoge prestatie vloeistofchromatografie in combinatie met tandem massaspectrometrie (HPLC-MS / MS) in klinische laboratoria enorm toegenomen in de afgelopen 10-12 jaar. De auteurs merken op dat de specificiteit van de HPLC-MS / MS-analyse aanzienlijk beter is dan die van immunologische methoden en klassieke hoge prestatie-vloeistofchromatografie (HPLC) bij de analyse van moleculen met laag moleculair gewicht en een aanzienlijk hogere prestatie heeft dan gaschromatografie-massaspectrometrie (GC-MS). De populariteit van deze methode in routinematige klinische analyses wordt momenteel verklaard door de unieke mogelijkheden van de methode.

    De belangrijkste voordelen van de HPLC-MS / MS-methode zijn:

  • De mogelijkheid van nauwkeurige kwantitatieve analyse van kleine moleculen;
  • Gelijktijdige analyse van meerdere doelverbindingen;
  • Unieke specificiteit;
  • Snelle analyse.
  • In de afgelopen jaren is veel aandacht besteed aan de analysetijd en bijgevolg aan de toename van de laboratoriumproductiviteit. Een aanzienlijke vermindering van de analysetijd werd mogelijk gemaakt door het gebruik van korte analytische kolommen voor HPLC / MS / MS, terwijl de specificiteit van de analyse sterk toenam. Het gebruik van de ionisatiemethode bij atmosferische druk (API), tandem triple quadrupole massaspectrometer en geavanceerde hoge prestatie vloeistofchromatografie, evenals geschikte methoden voor monsterbereiding, leidde HPLC-MS / MS naar de voorhoede van moderne analytische methoden voor klinische onderzoeken.

      De belangrijkste toepassingsgebieden van HPLC / MS / MS in de klinische geneeskunde zijn:

  • Het verkrijgen van een compleet metabolismeprofiel van steroïden (steroïdenpanelen), purines en pyrimidines en andere verbindingen,
    screening van pasgeborenen op congenitale metabole fouten (identificatie van enkele tientallen ziekten in één analyse);
  • Therapeutische monitoring van geneesmiddelen - immunosuppressiva, perivosudorozhnyh, antiretrovirale middelen, anticoagulantia en alle andere - ongeacht de aanwezigheid van de kits van de fabrikant. U hoeft geen dure kits voor elke stof te kopen - u kunt uw eigen methoden ontwikkelen;
  • Klinische toxicologie - analyse van meer dan 500 verdovende verbindingen en hun metabolieten in één analyse, zonder bevestigende analyse
    proteomics en metabolomics.
  • Daarnaast wordt HPLC-MSMS gebruikt voor het screenen van urine-oligosacchariden, sulfatiden, langketenige vetzuren, langketenige galzuren, methylmalonzuur, porfierstudies, screening van patiënten met verminderde purine en pyrimidinemetabolisme.

    Voorbeelden van toepassing van vloeistofchromatografie
    in combinatie met tandem massaspectrometrie in klinische analyses.

    Screening van pasgeborenen: Het eerste voorbeeld van het massale gebruik van HPLC-MS / MS bij klinische diagnose was screening van aangeboren metabole fouten bij pasgeborenen. Momenteel in ontwikkelde landen, is dit een routinemethode en omvat meer dan 30 verschillende ziekten, waaronder acetademias, aminozuuracidopathieën en vetzuuroxidatiefouten. Van bijzonder belang zijn studies van geboorteafwijkingen die tot ernstige problemen kunnen leiden als er geen onmiddellijke maatregelen worden genomen (bijvoorbeeld een vergroot hart of lever- of hersenoedeem). Het voordeel van het gebruik van HPLC-MS / MS voor het screenen van pasgeborenen is het vermogen om gelijktijdig alle aminozuren en acylcarnitines te analyseren op een snelle, goedkope en zeer specifieke methode.

    Therapeutische geneesmiddelenbewaking: de ontwikkeling en introductie van de immunosuppressieve sirolimus (rapamycine) om orgaanafstoting na transplantatie te voorkomen was een van de belangrijkste prikkels om HPLC-MS / MS in klinische laboratoria te introduceren. De huidige HPLC-MS / MS-methode maakt de gelijktijdige bepaling van tacrolimus, sirolimus, cyclosporine, everolimus en mycofeenzuur mogelijk.

    HPLC-MS / MS wordt ook gebruikt voor het analyseren van cytotoxische, antiretrovirale geneesmiddelen, tricyclische antidepressiva, anticonvulsiva en andere geneesmiddelen die een individuele dosering vereisen.

    De HPLC-MSMS-methode maakt de scheiding en kwantificering mogelijk van de R- en S-enantiomeren van warfarine in een concentratiebereik van 0,1-500 ng / ml.

    Narcotische en analgetische stoffen: HPLC-MS / MS wordt veel gebruikt voor de analyse van deze verbindingen vanwege de eenvoud van de monstervoorbereiding en de korte analysetijd. Momenteel wordt de methode in klinische laboratoria gebruikt voor screening op de aanwezigheid van een breed scala van narcotische stoffen. De unieke specificiteit en gevoeligheid van de methode maakt het mogelijk om tegelijkertijd meer dan 500 verbindingen van verschillende klassen in één monster te analyseren met minimale monstervoorbereiding. Dus, in het geval van urine-analyse, is een eenvoudige verdunning van het monster 50 - 100 keer voldoende. Bij het analyseren van haar, in plaats van een bundel van 100-200 haren, is één haar voldoende om de feiten van het gebruik van verdovende middelen op betrouwbare wijze te detecteren.

    Endocrinologie en steroïde-analyse: HPLC-MS / MS wordt veel gebruikt in veel laboratoria voor endocrinologie voor de analyse van steroïden - testosteron, cortisol, aldersteron, progesteron, oestriol en vele andere.

    Steeds meer laboratoria beginnen HPLC-MS / MS te gebruiken om de bloedspiegels van vitamine D3 en D2 te bepalen.

    I. Definitie van steroïden (steroïdeprofiel).

    Laboratoria in ziekenhuizen en klinieken zijn momenteel in staat gelijktijdig meerdere steroïden te bepalen met behulp van HPLC / MS / MS. Tegelijkertijd is er geen groot monstervolume nodig, wat vooral belangrijk is bij het analyseren van kindermonsters.

      Gevallen waarin het raadzaam is om meerdere (profilerende) steroïden te bepalen:

  • Congenitale bijnierhyperplasie (congenitale bijnierhyperplasie, CAH) is een aangeboren defect in de biosynthese van steroïden. Dit is een erfelijke groep van ziekten die wordt veroorzaakt door onjuiste activiteit van de enzymen van de bijnierschors, die leidt tot een afname van de productie van cortisol. Voor een betrouwbare diagnose van SAN wordt aanbevolen om cortisol, androstenedione en 17-hydroxyprogesteron te bepalen. HPLC / MS / MS maakt een nauwkeurige kwantitatieve bepaling van alle drie de steroïden mogelijk in een enkele analyse met een nauwkeurigheid van 100%.
  • Routine screening van pasgeborenen met behulp van immunoassays wordt gekenmerkt door een hoog niveau van positieve en fout-negatieve resultaten. De HPLC / MS / MS-bepaling van niet alleen cortisol, maar ook aldosteron en 11-deoxycortisol maakt het mogelijk primaire insufficiëntie van de bijnierschors van de secundaire te onderscheiden.
  • HPLC / MS / MS maakt de bepaling van steroïden voor prostatitis en chronisch bekkenpijn syndroom mogelijk.
  • Met HPLC-MS / MS kunt u het profiel van steroïden bepalen en de oorzaken van vroegtijdige puberteit in verband met de bijnierschors bij jonge kinderen identificeren. Het bleek dat de concentraties testosteron, androstenedione, dehydroepiandrosteron (DHEA) en het sulfaat bij deze kinderen iets hoger waren dan bij oudere kinderen in de controlegroep.
  • Bloedserum van actieve rokers, passieve rokers en niet-rokers wordt geanalyseerd op de aanwezigheid van 15 steroïde hormonen en schildklierhormonen om de relatie tussen patiënten blootgesteld aan rook en hormoonconcentraties te bestuderen.
  • HPLC / MS / MS wordt gebruikt om bepaalde vrouwelijke steroïde hormonen in de urine te profileren.
  • Met behulp van HPLC / MS / MS werden concentraties van neuroactieve hormonen geëvalueerd om diabetische neuropathie te voorkomen.
  • II. Bepaling van schildklierhormonen

    Routinemethoden voor het bepalen van schildklierhormonen zijn meestal gebaseerd op radioimmunoassay, wat duur is en alleen T3 en T4 kunnen worden bepaald, wat het vermogen om de functies van de schildklier te bepalen en volledig te beheersen kan beperken.

    • Momenteel wordt met behulp van HPLC-MSMS een gelijktijdige analyse uitgevoerd in serummonsters van vijf schildklierhormonen, waaronder thyroxine (T4), 3,3 ', 5-trijoodthyronine (T3), 3,3', 5'- (rT3), 3, 3'-dijoodthyronine (3,3'-T2) en 3,5-joodthyronine (3,5-T2) in het concentratiebereik van 1-500 ng / ml.
    • De HPLC / MS / MS-methode wordt ook gebruikt om de samenstelling van de hormonen van patiënten die een thyreoïdectomie ondergaan te analyseren. Concentratie niveaus van thyroxine (T4), triiodothyronine (T3), vrij T4 en het stimuleren van schildklierhormoon (TSH) na een operatie worden bepaald. HPLC / MS / MS is een uitstekende manier gebleken om de relatie tussen TSH- en schildklierhormoonconcentraties vast te stellen.
    • De HPLC / MS / MS-methode werd gebruikt om thyroxine (T4) in speeksel en menselijk serum te bepalen. De methode wordt gekenmerkt door een hoge reproduceerbaarheid, nauwkeurigheid en detectielimiet van 25 pg / ml. Studies hebben aangetoond dat er een diagnostisch verband is tussen de T4-concentraties in speeksel tussen euthyroid-patiënten en patiënten met de ziekte van Graves.

    De HPLC / MS / MS-methode heeft momenteel de gevoeligheid, specificiteit en nauwkeurigheid die nodig is om op betrouwbare wijze alle steroïden in biologische vloeistoffen te bepalen en verbetert dus de diagnostische mogelijkheden, vooral in het geval van het bepalen van steroïde sets.

    III. Bepaling van 25-oxyvitamine D door middel van HPLC / MS / MS

    25-hydroxy vitamine D (25 OD) is de belangrijkste circulerende vorm van vitamine D en de voorloper van zijn actieve vorm. (1,25-dioxivitamine D). Gezien de lange periode van zijn halfwaardetijd is de bepaling van 25 OD belangrijk voor het bepalen van de status van vitamine D in het lichaam van de patiënt. Vitamine D bestaat in twee vormen: vitamine D3 (cholecalciferol) en vitamine D2 (ergocalciferol). Beide vormen worden gemetaboliseerd tot de overeenkomstige 25OD-vormen. De beschikbaarheid van analysemethoden die beide vormen van een vitamine met hoge nauwkeurigheid kunnen bepalen en monitoring van patiënten met een verminderde vitamine D mogelijk maken, is zeer belangrijk voor de diagnose. De tot nu toe gebruikte methoden lieten niet toe om vitamine D2 en D3 afzonderlijk te bepalen. Bovendien wordt bij hoge concentraties vitamine D2 de detecteerbare hoeveelheid D3 onderschat. Een ander nadeel is het gebruik van radioactieve isotopen. Het gebruik van de HPLC / MS / MS-methode maakte het niet alleen mogelijk om het gebruik van radioactieve isotopen te vermijden, maar ook om de afzonderlijke bepaling van beide actieve vormen van de vitamine uit te voeren.

        De methode is van toepassing op de volgende patiënten:

  • Als u een laag gehalte aan vitamine D in het lichaam vermoedt;
  • Als een onverklaard toxisch effect wordt vermoed;
  • Bij onderzoek van patiënten die een behandeling ondergaan voor een laag gehalte aan vitamine D;
  • Het gebruik van HPLC / MS / MS maakte de afzonderlijke bepaling van beide vormen mogelijk tijdens patiëntbewaking.
  • IV. Bepaling van immunosuppressiva door HPLC / MS / MS

    Na orgaantransplantatie is het noodzakelijk om gedurende het hele leven immunosuppressiva te nemen om de afstotingsreactie te voorkomen. Met een zeer nauw therapeutisch bereik en hoge toxiciteit, hebben immunosuppressiva een individuele dosering nodig om het maximale effect te bereiken. Daarom is het van vitaal belang om de belangrijkste immunosuppressiva te controleren: cyclosporine A, tacrolimus, sirolimus en everolimus om de dosis medicijnen voor elke individuele patiënt te regelen, afhankelijk van de concentratie van het geneesmiddel in het bloed.

    Immunoassay wordt nog steeds gebruikt om de vermelde geneesmiddelen te controleren, maar deze methoden zijn duur en hun specificiteit, nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid zijn beperkt. Er zijn gevallen van overlijden van patiënten van onjuiste dosering van immunosuppressiva, gebaseerd op de resultaten verkregen met behulp van immunologische methoden. Momenteel worden immunoassays in klinische laboratoria vervangen door HPLC / MS / MS. Zo worden in de kliniek van de universiteit van München ongeveer 70 monsters dagelijks geanalyseerd op het gehalte aan sirolimus en cyclosporine A met behulp van een HPLC / MS / MS-systeem. Alle monstervoorbereiding en besturing van het apparaat wordt door één medewerker uitgevoerd. Het laboratorium schakelt ook over op tacrolimus-analyse volgens deze methode.

    • Het gebruik van HPLC / MS / MS voor de routinematige gelijktijdige bepaling van tacrolimus, sirolimus, ascomycine, demetiksisirolimus, cyclosporine A en cyclosporine G in het bloed is beschreven. Het bereik wordt bepaald door de concentratie van 1,0 - 80,0 ng / ml. Voor cyclosporine 25 - 2000 ng / ml. Gedurende het jaar werden meer dan 50.000 monsters in het laboratorium geanalyseerd.
    • Omdat werd vastgesteld dat het gelijktijdige gebruik van tacrolimus en sirolimus een positief therapeutisch effect heeft, werd een eenvoudige en effectieve HPLC / MS / MS-methode ontwikkeld voor hun afzonderlijke bepaling in bloed voor klinische analyses. De analyse van één monster duurt 2,5 minuten met een nauwkeurigheid van 2,46% - 7,04% voor tacrolimus en 5,22% - 8,30% voor sirolimus voor de gehele analysecurve. De ondergrens van de tacrolimusbepaling is 0,52 ng / ml, sirolimus - 0,47 ng / ml.

    V. Bepaling van homocysteïne door middel van HPLC / MS / MS

    Homocysteïne is van belang bij hart- en vaatziekten (trombo-embolie, hartaandoeningen, atherosclerose) en andere klinische aandoeningen (depressie, ziekte van Alzheimer, osteoporose, complicaties tijdens de zwangerschap, enz.). Bestaande homocysteïne-assays, waaronder immunoassays, zijn duur. Een snelle HPLC / MS / MS-methode is ontwikkeld voor het analyseren van homocysteïne voor routinematig klinisch gebruik bij het analyseren van een groot aantal monsters. Ionisatie werd uitgevoerd door de methode van elektrospray. De methode is reproduceerbaar, zeer specifiek en nauwkeurig. De voordelen van de werkwijze zijn ook lage kosten van reagentia en het gemak van monstervoorbereiding. Het is mogelijk om 500 of meer monsters per dag te analyseren.

    conclusie

    Opgemerkt moet worden dat, hoewel er momenteel aanzienlijk verbeterde immunoassay-methoden worden gebruikt, vanwege technische fundamentele beperkingen, deze methode nooit een precisie en specificiteit voor de doelstof zal hebben die vergelijkbaar is met HPLC-MSMS, vooral in de aanwezigheid van metabolieten. Dit leidt niet alleen tot een lage nauwkeurigheid van de ELISA-methode en een hoog percentage fout-positieve en fout-negatieve resultaten, maar maakt het ook niet mogelijk om de resultaten te vergelijken die zijn verkregen in verschillende klinische afdelingen met behulp van de ELISA-methode. Het gebruik van HPLC-MS / MS elimineert dit nadeel, maakt zeer specifieke, nauwkeurige en snelle analyse mogelijk van een groot aantal monsters met een groot vertrouwen in de aanwezigheid van metabolieten en in afwezigheid van interferentie van verwante en endogene stoffen in het plasma en bloed van patiënten.

    Ondanks de kennelijk hoge kosten van het instrumentcomplex, zoals de praktijk in de wereld laat zien, loont dit complex met goede werking in 1-2 jaar. Dit komt voornamelijk door de lage kosten van één analyse vanwege de gelijktijdige analyse van tientallen en honderden verbindingen en het ontbreken van de noodzaak om dure diagnostische kits aan te schaffen. Bovendien heeft het laboratorium de mogelijkheid om zelfstandig noodzakelijke analysemethoden te ontwikkelen en niet afhankelijk te zijn van de fabrikant van de kits.

    De juiste configuratie van het instrumentcomplex kiezen

    Er zijn een groot aantal verschillende methoden van massaspectrometrie en soorten massaspectrometers ontworpen om een ​​breed scala aan taken op te lossen - van de structurele identificatie van complexe eiwitmacromoleculen die honderdduizenden Dalton wegen tot de routinematige hoogwaardige kwantitatieve analyse van kleine moleculen.

    Voor de succesvolle oplossing van de taak is een van de basisvoorwaarden de keuze van het juiste type apparatuur. Er is geen universeel apparaat dat het mogelijk maakt om het hele scala aan analytische taken op te lossen. Een apparaat dat is ontworpen om het probleem van het identificeren van micro-organismen op te lossen, is dus niet in staat om kwantitatieve analyse van kleine moleculen uit te voeren. En vice versa. Feit is dat dit, ondanks de gebruikelijke naam, compleet verschillende apparaten zijn die op verschillende fysieke principes werken. In het eerste geval is dit een time-of-flight massaspectrometer met een laserionisatiebron, MALDI-TOF en in de tweede, een drievoudige quadrupole met electrospray-ionisatie, HPLC-MSMS.

    De tweede belangrijkste parameter is de keuze van de juiste systeemconfiguratie. Er zijn verschillende grote fabrikanten van apparatuur voor massaspectrometrie. De apparaten van elke fabrikant hebben niet alleen hun eigen sterke punten, maar ook zwakke punten, waar ze meestal liever niet over zwijgen. Elke fabrikant produceert zijn eigen lijn van apparaten. De kosten van één analytisch complex liggen in het bereik van $ 100.000 tot 1.000.000 of meer dollars. De keuze van de optimale fabrikant en de juiste configuratie van de apparatuur zal niet alleen aanzienlijke financiële middelen besparen, maar ook effectiever de taak oplossen. Helaas zijn er veel voorbeelden wanneer het laboratorium was uitgerust zonder rekening te houden met deze factoren. Het resultaat - niet-actieve apparatuur, verspild geld.

    De derde factor die het succes van het laboratorium bepaalt, is het personeel. Massaspectrometers hebben hooggekwalificeerd personeel nodig. Helaas heeft geen enkele universiteit in Rusland een cursus in moderne praktische massaspectrometrie, vooral met betrekking tot klinische toepassingen, en de taak van het opleiden van de medewerkers van elk laboratorium moet op zichzelf worden opgelost. Uiteraard is 2-3 dagen vertrouwdmakingstraining, uitgevoerd door de fabrikant na de lancering van de apparatuur, absoluut onvoldoende om de basisprincipes van de methode te begrijpen en vaardigheden in het apparaat te verwerven.

    De vierde factor is het ontbreken van kant-en-klare analysemethoden. Elk laboratorium heeft zijn eigen prioriteiten, waarvoor het nodig is om zijn eigen methoden te ontwikkelen. Dit kan worden gedaan door een persoon met minstens 2-3 jaar ervaring in het apparaat. Productiebedrijven leveren soms een of twee algemene methoden van aanbeveling, maar passen ze niet aan aan de specifieke taken van het laboratorium.

    In "BioPharmEkspert" LLC zijn er specialisten met vele jaren ervaring in het werken aan verschillende soorten massaspectrometers, evenals de ontwikkeling van methoden en de formulering van krachtige analyses. Daarom bieden wij de volgende diensten:

    1. Selectie van de optimale configuratie van het apparaat voor specifieke taken van de klant.
    2. Aankoop, levering en opstarten van apparatuur van toonaangevende fabrikanten van tandem-massaspectrometers. Geleidelijke training van personeel binnen een jaar vanaf het moment van lancering van de apparatuur.
    3. Een set kant-en-klare methoden en databases voor het oplossen van elementaire klinische problemen.
    4. Ontwikkeling van analysemethoden en het oplossen van specifieke taken van de cliënt in zijn laboratorium met medewerking van zijn personeel.
    5. Methodische ondersteuning in alle stadia van het werk.

    Bloedbepaling met voorlopige derivatisering (TMS-derivaten)

    Tweedimensionale gaschromatografie - time-of-flight massaspectrometrie voor plasma-analyse met voorlopige derivatisering (TMS-derivaten), waarmee de bepaling van glucose 5TMS wordt aangetoond

    De analyse van bloedplasmametabolieten door middel van tweedimensionale gaschromatografie-time-of-flight massaspectrometrie met voorlopige derivatisering (TMS-derivaten) demonstreert de detectie van 5TMS glucose met een coïncidentie van 901.