Het antiproliferatieve effect is

Eten

Wanneer een infectie optreedt in het menselijk lichaam, ontwikkelen zich immuunreacties met complexe cellulaire interacties. Regelaars van deze interacties zijn speciale eiwitmoleculen - cytokinen. Tot op heden zijn meer dan 200 verschillende signaalmoleculen bestudeerd. Hun eigenaardigheid is dat zij zelf geen enkel effect op vreemde antigenen kunnen hebben en uitsluitend dienen om informatie van de ene cel naar de andere over te brengen. Zonder de deelname van cytokines is de ontwikkeling van een normale immuunrespons onmogelijk. Een van de belangrijkste cytokinen is interferon.

Er zijn drie soorten interferon: interferon-alfa (INF-α), interferon-betta (INF-β), interferon-gamma (INF-γ). Alle interferonen hebben antivirale, immuunmodulerende, antitumor- en antiproliferatieve effecten. Naast de algemene eigenschappen hebben interferonen een aantal verschillen.

INF-α en INF-β lijken meer op elkaar. Hun genen bevinden zich op chromosoom 9. Beide inducerende signalen genereren zijn virussen. Ze hebben een uitgesproken antiviraal en antitumoreffect, vertonen in veel mindere mate immunomodulerende eigenschappen. De belangrijkste cellen die voor INF-α produceren, zijn macrofagen, voor INF-β-epitheelcellen, fibroblasten.

INF-γ heeft een uitgesproken immunomodulerend effect, samen met interleukine-2 (IL-2) en tumornecrosefactor (TNF of TNF) is het belangrijkste pro-inflammatoire cytokine, is een inductor van de cellulaire link van immuniteit. Antivirale en antitumor eigenschappen zijn minder uitgesproken dan die van INF-α en INF-β. Het gen INF-γ bevindt zich op chromosoom 12, de belangrijkste cellen die produceren zijn T-lymfocyten, natuurlijke of natuurlijke killercellen (NK-cellen). Het inductieve signaal voor productie kan elk antigeen of andere cytokinen zijn.

Het antivirale effect van interferonen is om de synthese van viraal RNA te onderdrukken en de synthese van virale envelopeiwitten te onderdrukken. Het mechanisme van dit effect is de activering van intracellulaire enzymen, zoals bijvoorbeeld proteïnekinase of adenylaatsynthetase. Proteïne-kinase vernietigt de initiatie-factor van eiwitsynthese met messenger-RNA, dat eiwitsynthese remt. Adenylaatsynthetase - veroorzaakt de synthese van stoffen die viraal RNA vernietigen.

Het immunomodulerende effect van interferonen is het vermogen om de interactie van cellen die betrokken zijn bij de immuunrespons te reguleren. Interferonen zullen deze functie uitvoeren door de gevoeligheid van cellen voor cytokinen en de expressie op de celmembranen van moleculen van het belangrijkste histocompatibiliteitscomplex van type I (GCG1) te reguleren. Verbetering van de expressie van GKG1 op met virus geïnfecteerde cellen verhoogt aanzienlijk de waarschijnlijkheid dat ze door immunocompetente cellen en elelenii uit het lichaam worden herkend. INF-γ heeft de meest uitgesproken immunomodulerende eigenschappen. Als een product van type I T-lymfocyten activeert het samen met andere pro-inflammatoire cytokines macrofagen, T-cytotoxische lymfocyten, natural killer-cellen (NK-cellen), remt B-lymfocytenactiviteit, activeert prostaglandine en corticosteroïde systemen. Al deze factoren versterken fagocytische en cytotoxische reacties op het gebied van de inflammatoire focus en dragen bij aan de effectieve eliminatie van het infectieuze agens.

Het antitumoreffect van interferonen hangt samen met hun vermogen om de groei van celculturen te vertragen of te remmen en de antitumormechanismen van het immuunsysteem te activeren. Deze eigenschap van interferon is al lang geleden ontdekt en wordt veel gebruikt voor therapeutische doeleinden. Alle antitumoreffecten van interferon zijn onderverdeeld in direct en indirect. Direct zijn geassocieerd met het vermogen om een ​​direct effect op de tumorcellen te hebben, hun groei en differentiatie. Indirect is geassocieerd met het versterken van het vermogen van immunocompetente cellen om atypische cellen van het lichaam te detecteren en te vernietigen.

Direct antitumoreffecten van interferon:

  • Remming van RNA-synthese.
  • Onderdrukking van eiwitsynthese.
  • Stimulatie van ongedifferentieerde cellen tot rijping.
  • Verhoogde expressie van tumorcelmembraan-antigenen en hormoonreceptoren.
  • Overtreding van de processen van bloedvatvorming.
  • Neutralisatie van oncovirussen.
  • Onderdrukking van tumorgroeifactoren.

Indirecte antitumor effecten van interferon:

  • Stimulatie van de activiteit van cellen van het immuunsysteem (macrofagen, NK-cellen, T-cytotoxische lymfocyten).
  • Verbetering van expressie op de cellen van histocompatibiliteit klasse I-moleculen.

Het antiproliferatieve effect van interferonen ligt in het vermogen van interferonen om cytostatische eigenschappen te vertonen - celgroei te remmen door RNA- en eiwitsynthese te onderdrukken, evenals de groeifactoren die celproliferatie stimuleren te remmen.

Glucocorticoïden (antiproliferatief effect)

Het antiproliferatieve effect van glucocorticoïden is geassocieerd met de beperking van de blootstelling van monocyten aan de inflammatoire focus en de remming van de deling van fibroblasten door zowel de hormonen zelf als een afname van het stimulerende effect op hen van histamine, serotonine en kininen, waarvan de vorming door deze steroïden wordt verminderd.

Bovendien onderdrukken glucocorticoïden de synthese van mucopolysacchariden en beperken daardoor de binding van water en plasma-eiwitten aan weefsels, die samen met het exsudaat gebonden zijn aan de focus van reumatische ontsteking. Als gevolg hiervan zijn de zwelling en, belangrijker nog, de ontwikkeling van de fibrinoïde fase van reumatische ontsteking en vervolgens hyalinose verminderd.

Dientengevolge worden schendingen in de structuur van de kleppen van het hart, myocardium, bloedvaten enz. Voorkomen of aanzienlijk verminderd.Het meest goede effect ontstaat wanneer glucocorticoïden samen met niet-steroïde anti-inflammatoire geneesmiddelen worden gebruikt.

Glucocorticoïden worden ook gebruikt om te compenseren voor hun deficiëntie in het lichaam en voor de regulatoire impact op verminderde functies.

Om het gebrek glucocorticoïde hormonen corrigeren indien gebruikt als primaire bijnierinsufficiëntie (ziekte van Addison, bloeding in de bijnier cortex bij sepsis, geboorte letsel, hypoxie), met het kenmerk insufficiëntie en gluco- en minerale corticoïden, en secundaire bijnierinsufficiëntie (hypopituïtarisme, hypothalamus inhibitiesysteem - hypofyse - bijnierschors als gevolg van langdurig gebruik van glucocorticoïden), alleen gekenmerkt door insufficiëntie van glucocorticoïden.

"Pediatric Pharmacology", I.V. Markova

Het voorschrijven van corticosteroïden om de andere dag kan de remming van de hypothalamus - hypofyse ----------------- systeem van de bijnieren en suppressie van niet-specifieke resistentie tegen infectie voorkomen of verminderen. J. Melby (1977) vermeldde de indicaties waarvoor bij de meeste patiënten glucocorticoïd om de andere dag kan worden voorgeschreven, evenals ziekten waarvoor dit niet mogelijk is. Je kunt elke dag glucocorticoïden gebruiken voor de volgende ziekten: bronchiale...

Bij het voorschrijven van corticosteroïden in gevallen die geen spoedbehandeling behoeven, wordt aanbevolen om rekening te houden met het dagelijkse ritme van de uitscheiding van endogene hormonen in de bijnierschors. Aan het begin van de behandeling moeten de meeste (meestal 2/3) doses 's ochtends worden voorgeschreven, 7 tot 8 uur, de rest -' s middags, 13 tot 14 uur.Wanneer de dagelijkse dosis wordt verdeeld in drie doses, worden deze toegediend op 7, 10...

Het natuurlijke mineralocorticoïde - aldosteron - wordt geproduceerd door de glomerulaire zone van de bijnierschors; Dit proces wordt gereguleerd door angiotensine II, dat wordt gevormd onder invloed van renine. Deoxycorticosteronacetaat (DOXA) en DOX-trimethylacetaat worden als geneesmiddelen gebruikt. Indicaties voor gebruik. Mineralocorticoïden worden gebruikt voor intestinale toxicose in combinatie met infusietherapie. Ze worden ook gebruikt bij acute hypotensie geassocieerd met het verlies van natrium en water (maar...

Indicaties voor langdurige toediening van hoge doses glucocorticoïden. Ze worden gedurende enkele weken en zelfs maanden gebruikt bij de behandeling van auto-immune hemolytische anemie, trombocytopenische purpura, enige nefritis, colitis ulcerosa, sarcoïdose, acute leukemie, gegeneraliseerde ziekte van Hodgkin, niet-reumatische carditis, soms met ernstige bronchiale astma. In de meeste gevallen hangt het therapeutische effect hier af van de onderdrukking van cytolysisreacties, in het bijzonder van allergische genesis....

Anabole steroïden: methandrostenolone (Dianabol, nerobol), methylandrostediol (methandriol), fenobolin (durabolin, nerobolil), retabolil - stoffen verkregen door synthese van mannelijke geslachtshormonen (androgenen). Androgenen hebben twee verschillende effecten: androgeen (d.w.z. het stimuleren van de ontwikkeling van secundaire geslachtskenmerken) en anabolisch. Anabole steroïden verschillen van androgenen in structuur, en hun androgene eigenschappen worden sterk verminderd (100 keer of meer)....

Antiproliferatieve geneesmiddelen - Lijst met medicijnen en medicamenten

Beschrijving van de farmacologische werking

Antiproliferatieve werking is gericht op het onderdrukken van de buitensporige proliferatie van verschillende cellen. Het werkingsmechanisme is anders en hangt af van het specifieke medicijn en het type cellen waarop deze actie is gericht. In het bijzonder kan het mechanisme van deze actie worden geassocieerd met het verschaffen van een modulerend effect op de synthese van bepaalde oncogenen, hetgeen leidt tot de normalisatie van neoplastische celtransformatie en remming van tumorgroei. Of het werkingsmechanisme kan gebaseerd zijn op de remming van fibroblastproliferatie, gestimuleerd door de belangrijkste factor van fibroblastgroei. Geneesmiddelen met antiproliferatieve effecten worden gebruikt bij de behandeling en preventie van verschillende oncologische ziekten, prostaatadenomen en verschillende chronische huidziekten (bijvoorbeeld psoriasis).

Drugs zoeken

Preparaten met farmacologische werking "Antiproliferatief"

  • Een
  • Avonex (Lyofilisaat voor de bereiding van een oplossing voor injecties)
  • Avonex (oplossing voor intramusculaire toediening)
  • Adenostop (concentraat voor de bereiding van drank)
  • Altevir (oplossing voor injectie)
  • Alfaferon (Oplossing voor injectie)
  • Arava (orale tabletten)
  • B
  • Beloderm (crème voor uitwendig gebruik)
  • Beloderm (zalf voor uitwendig gebruik)
  • D
  • Genferon (rectale zetpillen)
  • Genferon Light (neusspray)
  • D
  • Dilatrend (orale tabletten)
  • L
  • Leflunomide (Powder Substance)
  • Leflunomide (orale tabletten)
  • P
  • Permixon (Capsule)
  • P
  • Realdiron (lyofilisaat voor de bereiding van de oplossing voor subcutane toediening)
  • Ronbetal (oplossing voor subcutaan gebruik)
  • T
  • Tadenan (Capsule)
  • Tykveol (olie voor orale toediening)
  • Tykveol (rectale zetpillen)
  • Tykveol (capsule)

Waarschuwing! De informatie in deze medicatiehandleiding is bedoeld voor medische professionals en mag geen basis zijn voor zelfbehandeling. Beschrijvingen van geneesmiddelen worden gegeven voor kennismaking en zijn niet bedoeld voor de benoeming van een behandeling zonder de deelname van een arts. Er zijn contra-indicaties. Patiënten hebben deskundig advies nodig!

Als u geïnteresseerd bent in andere antiproliferatieve middelen en preparaten, hun beschrijvingen en instructies voor gebruik, synoniemen en analogen, informatie over de samenstelling en vorm van afgifte, indicaties voor gebruik en bijwerkingen, gebruiksmethoden, doseringen en contra-indicaties, opmerkingen over kindermedicatie, pasgeborenen en zwangere vrouwen, de prijs en beoordelingen van geneesmiddelen of u hebt andere vragen en suggesties - schrijf ons, we zullen zeker proberen om u te helpen.

antiproliferatieve

Antiproliferatieve werking is gericht op het onderdrukken van de buitensporige proliferatie van verschillende cellen.

Het werkingsmechanisme is anders en hangt af van het specifieke medicijn en het type cellen waarop deze actie is gericht. In het bijzonder kan het mechanisme van deze actie worden geassocieerd met het verschaffen van een modulerend effect op de synthese van bepaalde oncogenen, hetgeen leidt tot de normalisatie van neoplastische celtransformatie en remming van tumorgroei. Of het werkingsmechanisme kan gebaseerd zijn op de remming van fibroblastproliferatie, gestimuleerd door de belangrijkste factor van fibroblastgroei.

Geneesmiddelen met antiproliferatieve effecten worden gebruikt bij de behandeling en preventie van verschillende oncologische ziekten, prostaatadenomen en verschillende chronische huidziekten (bijvoorbeeld psoriasis).

Antiproliferatief middel

De uitvinding heeft betrekking op de farmaceutische industrie, in het bijzonder op de middelen van natuurlijke oorsprong, met antiproliferatieve activiteit. Het middel met antiproliferatieve activiteit is een Toxocara canis-eiwitextract, verkregen door extractie van een helminth-homogenaat T. Canis-fosfaat-zoutoplossingbufferoplossing met een pH van 7,2 in de verhouding van 1:10 gedurende 36-48 uur bij 4 ° C, centrifugatie. Het bovenstaande hulpmiddel heeft een uitgesproken antiproliferatieve activiteit. 1 pk f-ly, 1 tab., 2 ex.

De uitvinding heeft betrekking op het gebied van geneeskunde en diergeneeskunde, in het bijzonder op een nieuw middel van natuurlijke oorsprong, dat een antiproliferatief effect heeft.

De moderne geneeskunde heeft een tamelijk uitgebreid arsenaal aan medicijnen voor chemotherapie van tumoren. De meeste chemotherapeutische middelen worden weergegeven door groepen alkylerende antineoplastische geneesmiddelen, antimetabolieten, antitumorantibiotica, antitumorhormoongeneesmiddelen, immunomodulatoren en enkele andere met een ander werkingsmechanisme. De meeste van deze geneesmiddelen tegen kanker zijn zeer toxisch en daarom worden het schema en de duur van de chemotherapie gekozen waarbij rekening wordt gehouden met de manifestatie van bijwerkingen, die de effectiviteit van de behandeling in het algemeen beïnvloedt.

Natuurlijke antitumor medicijnen van plantaardige oorsprong zijn bekend (Vinca roseal alkaloïden (vinblastine, vincristine), taxus alkaloïden (taxanen) (paclitaxel, docetaxel); )) en bacteriële oorsprong (rubromycine en andere), die beperkt gebruik hebben, ook vanwege de hoge toxiciteit en het smalle therapeutische werkingsspectrum (behandeling van sommige soorten s tumor, bij voorkeur met exophytic groei).

Daarom is er behoefte aan nieuwe, zeer effectieve antikankergeneesmiddelen van natuurlijke oorsprong, die een breed werkingsspectrum zouden hebben en minder toxisch zouden zijn.

Helminten - de algemene naam voor parasitaire wormen die leven bij mensen, andere dieren en planten die worminfecties veroorzaken.

Helminten omvatten vertegenwoordigers van lintwormen of cestoden, staartvinnen of trematoden (beide groepen behoren tot platwormen) en spoelwormen, of nematoden.

De laatste omvatten toxocars (in het bijzonder Toxocara canis). T. canis is een nematode die parasitair is in de darmen van carnivoren, zoals honden; invasieve ziekte bekend als toxocariasis.

Tijdens het parasitisme produceren helminten verschillende metabole producten. De uitscheidingsafscheidende afvalproducten van wormen zijn onnatuurlijke stoffen voor het gastheerorganisme in zijn fysiologische processen.

Het is bekend dat pathogenen van invasies een modulerend effect kunnen hebben op het beloop van vele ziekten van de meest gevarieerde etiologie, inclusief maligniteiten (bijvoorbeeld Vasilev S. et al. (2015).) In het bijzonder zijn er meldingen dat infectie met nematode Trichinella spiralis ( reproductie van trichinose) leidt tot de onderdrukking van de groei van kwaadaardige cellen en verhoogt de overleving van dieren na inoculatie van B-16 melanoomcellen in vivo (Molinari JA, Ebersole JL, 1977; Pocock D., Meerovitch E., 1982; Kang YL et al., 2013) Er zijn ook gegevens beschikbaar over de metabolismeproducten van T. spira Dit heeft een remmend effect op de groei en overleving van tumorcellen in vitro (Vasilev S. et al., 2015; Wang X. L. et al., 2009; Wang X. L. et al., 2013).

Onderzoeken om de antitumoractiviteit van T. canis of de metabole producten van deze waaktoestanden te beoordelen, zijn niet eerder uitgevoerd.

Het doel van de uitvinding is om eiwitextracten uit weefsels T. canis, evaluatie van hun antiproliferatieve effecten op modellen van tumorcellen van verschillende lijnen te verkrijgen en hun mogelijk gebruik in de toekomst als een effectief antitumormiddel te verzekeren.

De essentie van de uitvinding ligt in het feit dat het middel met antiproliferatieve activiteit een eiwitextract is van wormen, in het bijzonder Toxocara canis-extract. Opgemerkt moet worden dat de omstandigheden voor het verkrijgen van een extract van het helminth-homogenaat, waaronder T. canis, afhankelijk zijn van het gebruikte biologische materiaal, en de essentiële kenmerken van het verkrijgen van eiwitextracten zijn extractie met fosfaat-zoutoplossingbuffer met pH = 7,2.

Het extract heeft een uitgesproken antiproliferatief en cytostatisch effect op modellen van humane tumorcellen in vitro. Zoals hierboven vermeld, is toxocar-extract niet eerder getest op modellen van humane tumorcellen in vitro.

Vanwege de natuurlijke oorsprong van het voorgestelde antiproliferatieve middel kan het minder toxisch zijn in de aanwezigheid van een hoge antitumoreffectiviteit van een breed werkingsspectrum.

Voorbeelden van specifieke prestaties

Voorbeeld 1. Bereiding van eiwitextract T. canis.

Als middel, vermoedelijk met antiproliferatieve activiteit, gebruikt eiwitextract van volwassen T. canis, vooraf gezuiverd van verbindingen met laag molecuulgewicht.

Grondig gewassen met gedestilleerd water, vervolgens met een fysiologische oplossing, vers bevroren geslachtsrijpe wormen - Toxocara canis werden onderworpen aan schaarslijpen, homogenisatie in een porseleinen vijzel geplaatst in een schaal met ijs. In het proces van homogenisatie werd het resulterende biomateriaal onderworpen aan meerdere bevriezing en ontdooiing (3-5 maal) met gelijktijdig malen om de structuur van het uitgangsmateriaal volledig te vernietigen om een ​​homogene homogene massa te verkrijgen. Als een extractiemiddel van eiwitten van het verkregen homogenaat van T. canis, werd fosfaat-zoutoplossing bufferoplossing pH 7,2 gebruikt, die volgens het recept werd bereid (natriumchloride, 8,5 g, digesubstitueerd natriumfosfaat, 1,15 g, mono-fosforzuur, kalium, 0 2 g in 1 1 gedestilleerd water) in een verhouding van 1:10. Extractie werd uitgevoerd onder gekoelde omstandigheden bij + 4 ° C gedurende 48 uur onder constant roeren op een magnetische roerder. Na de extractietijd werd het resulterende biomateriaal 20 minuten bij 15.000 rpm gecentrifugeerd in een Optima TLX gekoelde centrifuge (tafelmodel centrifuge bestuurd door een microprocessor Becman Coulter Herneshal, S.A.). Het eiwitextract van T. canis verkregen na centrifugatie werd bevrijd van eiwitten met laag molecuulgewicht door dialyse tegen fosfaat-zoutoplossing bufferoplossing verdund met gedestilleerd water in een verhouding van 1:10.

Het verkregen eiwitextract werd bewaard bij -20 ° C. Met behulp van polyacrylamidegelelektroforese werd bepaald dat het eiwitextract van T. canis meer dan 20 eiwitfracties met verschillende elektroforetische mobiliteit en molecuulgewicht bevat.

Voorbeeld 2. Evaluatie van het effect van T. canis-proteïne-extract op kweken van menselijke borstkankercellen (MCF-7) en humane colon (Caco-2) afhankelijk van de concentratie van het extract.

Het doel van dit experiment was om het effect van het eiwitextract T. canis op de proliferatie van humane tumorcellen van twee lijnen te beoordelen.

Materialen en methoden

Doelcellen. Twee epitheliale cellijnen werden in dit werk gebruikt: MCF-7 (humaan borstadenocarcinoom) en Caco-2 (humaan karteldarmadenocarcinoom). De cellen, buiten het experiment, werden opgeslagen in vloeibare stikstof. Voordat de onderzoeken werden uitgevoerd, werden de ampullen met cellen ontdooid en gekweekt met standaardmethoden in kweekflessen (CORNING, Flask, 25 cm2, VS) in DMEM GlutaMAX-groeimedium (Gibco) met de toevoeging van 10% FBS en antibioticum / antimycoticum (Gibco, x 100). hoge luchtvochtigheid2-incubator (New Brunswick, Galaxy 170R) bij T = 37 ° C in een atmosfeer van 5% CO2.

Het bestudeerde eiwitextract. Het onderzochte eiwitextract T. canis (voor bereiding, zie voorbeeld 1) is een extract in fosfaat-gebufferde zoutoplossing, niet steriel. De eiwitconcentratie in de stamoplossing was 10,9 mg / ml. Voorafgaand aan het onderzoek werd de oplossing bewaard bij -70 ° C.

Voor gebruik werd de buis met het eiwitextract ontdooid bij kamertemperatuur. In een in vitro experiment werd het eiwitextract getest bij de volgende eiwitconcentraties: 12,5, 25, 50, 100, 250, 500, 1 en 2 mg / ml. Voor de bereiding van verdunningen werd DMEM GlutaMAX-groeimedium (DGIBCO) met 2% FBS en antibioticum gebruikt.

Voor het experiment werd een werkoplossing met een concentratie van 2 mg / ml, na sterilisatie door een Millipore map spuitmond (0,22 μ) werden bereid door verdunning van het extract van T. canis: 1, 500, 250, 100, 50, 25 en 12,5 μg / ml met behulp van groeimedium DMEM GlutaMAX (DGIBCO) met 2% FBS en antibioticum.

Voor het experiment werden MCF-7 en Caco-2-cellen geïncubeerd volgens de standaardprocedure om een ​​subconfluente monolaag te verkrijgen. In de fase van actieve groei werd de celmonolaag gedispergeerd met een trypsine / versaen-oplossing, de resulterende cellen werden opnieuw gesuspendeerd in DMEM GlutaMAX-groeimedium (Gibco) met 10% FBS en een standaard concentratie antibioticum. Vers bereide celsuspensie werd gezaaid in platen met 24 putjes (SARSTEDT, Duitsland) bij 35 x 103 cellen per putje voor MCF-7-cellen en bij 30 x 103 cellen per putje voor Caco-2-cellen. Daarna werden de platen in CO geplaatst2-incubator gedurende 3 uur totdat de cellen uitgespreid. Vervolgens werd medium met niet-hechtende cellen uit de putjes verwijderd en groeimedium werd aan de experimentele putjes toegevoegd met testconcentraties van de stof (in 4 herhalingen voor elke testconcentratie). Als een controle bleven er vier putjes over met cellen die werden gekweekt in een compleet groeimedium met 2% FBS zonder de teststof. Het uiteindelijke volume groeimedium in de controle- en experimentele groepen van 500 μl per putje.

Tijdens het experiment werd de dagelijkse licht-optische waarneming van de cellen uitgevoerd met behulp van een omgekeerde Olympus CK 40 microscoop (Japan), waarbij de aanwezigheid of afwezigheid van veranderingen in celmorfologie in de experimentele putjes werd beoordeeld in vergelijking met de controle. De proliferatieve respons van tumorcellen op de werking van het onderzochte extract van T. canis werd beoordeeld door de dichtheid en levensvatbaarheid van de gevormde monolaag na 96 uur incubatie van de cellen in de aanwezigheid van het onderzochte extract.

De levensvatbaarheid van de cellen werd bepaald met behulp van de standaard celtellingprocedure in de Goryaev-kamer met voorafgaande kleuring van de celsuspensie met trypanblauwe oplossing. Voor dit doel werd de monolaag gedispergeerd met een trypsine / verssen-oplossing, de cellen werden opnieuw gesuspendeerd in het groeimedium en de bereide celsuspensie werd gekleurd met 0,4% Trypan Blue-oplossing (SIGMA). Daarna werden de cellen geteld in de Goryaev-kamer. Om dit te doen, werd het totale (totale) aantal cellen en het aantal gekleurde (niet-levensvatbare) cellen in elk putje geteld.

% levensvatbare cellen (N.goed) berekend door de formule

waar nt - totaal (totaal) aantal cellen in de put;

Nover - het aantal gekleurde (niet-levensvatbare) cellen in de put.

Het effect van het onderzochte extract van T. canis op de proliferatieve activiteit van tumorcellen MCF-7 en Caco-2 werd na 96 uur geëvalueerd, waarbij het totale aantal cellen in de experimentele wells ten opzichte van de controle werd vergeleken.

Tijdens het experiment waarbij het effect van de test extract van T. canis bij concentraties aangegeven op epitheliale culturen van humane borstkankercellen (MCF-7) en humaan colon (Caco-2) werd uitgevoerd dagelijks visuele controle over de aard van de groei en morfologie van de groeiende kolonies van cellen. Na 24 en 48 uur in alle experimentele wells met MCF-7 en Caco-2-cellen, is de dichtheid van kolonies vergelijkbaar met de controle. Er werden geen morfologische veranderingen gevonden. Detritus was volledig afwezig.

Na 72 uur werd een significante groeiaag waargenomen in MCF-7 en Caco-2-cellen bij een concentratie van 2 mg / ml. Er werd opgemerkt dat in de experimentele putjes bij 2 mg / ml de grootte van de kolonies kleiner was dan in de controlegroep; ook in het gezichtsveld is het aantal mitotische delende cellen merkbaar verminderd en werden geen morfologische veranderingen opgemerkt. In de putjes van MCF-7 en Caco-2-cellen bij 1 en 500 μg / ml werd een lichte groeiaag waargenomen in vergelijking met de controle. In de experimentele putjes met een concentratie van 12,5, 25, 50 en 250 μg / ml werden geen verschillen gevonden in vergelijking met de controlegroep K.

Na 96 uur kweken in MCF-7 en Caco-2-cellen in concentraties van 2, 1 en 500 μg / ml, werden significant minder prolifererende kolonies waargenomen in het gezichtsveld, met een kleiner aantal cellen, vergeleken met die van de controlegroep. Morfologische veranderingen werden alleen waargenomen in MCF-7-cellen bij een maximale concentratie van 2 mg / ml. In deze experimentele groep werden individuele kolonies waargenomen, waarin cellen zonder duidelijke en uitgesproken contouren met een verlies van karakteristiek patroon werden waargenomen. Het aantal mitotische delende cellen in het gezichtsveld is verminderd. In dit geval was het afval in de omgeving afwezig.

Nadat het experiment was voltooid, na 96 uur, werden de cellen getrypsiniseerd, de resulterende celsuspensie werd gekleurd met een 0,4% trypanblauwe oplossing en het aantal cellen werd geteld in een Goryaev-kamer. De resultaten van telcellen zijn weergegeven in tabel 1.

Uit de gegevens in tabel 1 volgt dat het onderzochte extract van T. canis het aantal levensvatbare Caco-2-cellen niet significant beïnvloedde na 96 uur incubatie. Bij concentraties van 2, 1 en 500 μg / ml was het aantal levensvatbare cellen van de humane colon dus 90,0, 88,5 en 88%, wat vergelijkbaar is met de controlegroep van cellen, waarbij de levensvatbaarheid 96% is. Tegelijkertijd werd bij dezelfde concentratiewaarden een significante afname van het totale aantal cellen waargenomen in vergelijking met de controlegroep. Aldus was het totale aantal Caco-2-cellen in de controlegroep na 96 uur kweken 116,7 x 103 cellen / putje en bij 500 waren 1 en 2 mg / ml 72,0 x 103, 63,3 x 10 3 en 65,9 x 103 cellen / putje respectievelijk. Bij extractconcentraties van 12,5 tot 250 μg / ml was het totale aantal cellen vergelijkbaar met de controlegroep en varieerde van 94,0 x 103 tot 106,0 x 103 cellen / putje. Op basis hiervan kan worden geconcludeerd dat hoge concentraties van T. canis-extract van 500 tot 2 mg / ml de proliferatieve activiteit van de Caco-2-tumorcellen remmen.

Bij vergelijking van de verkregen resultaten (tabel 1) met het effect van T. canis-extract op de kweek van menselijke borst- en humane colon-tumorcellen, kan worden aangenomen dat MCF-7-cellen gevoeliger zijn voor het negatieve effect van de teststof. Aldus volgt uit de gegevens in Tabel 1 dat het aantal levensvatbare MCF-7-cellen geleidelijk daalde van 95,2% met een minimale dosis van 12,5 tot 79,5% met een maximale waarde van 2 mg / ml, vergeleken met een controlewaarde van 96,8 %. Een zwakke remming van de test extract op de proliferatieve activiteit van MCF-7 cellen werd reeds geopenbaard in een concentratie van 50 ug / ml, waarbij het totale aantal cellen bedroeg 151,9 x 10 maart cellen / putje, vergeleken met een referentiewaarde 181,3 x 10 maart cellen / het gat. Met een toename in concentratie van 100 μg / ml en hoger nam het remmende effect van het extract evenredig toe tot de concentratie en bereikte de maximale waarden bij 2 mg / ml, waarbij het totale aantal cellen driemaal daalde vergeleken met de controle en was 60,0 x 103 cellen / putje.

Op basis van de resultaten die in dit werk zijn verkregen, kunnen we het volgende concluderen.

1. Het onderzochte extract van T. canis heeft een uitgesproken antiproliferatief effect op MCF-7-cellen in concentraties van 100, 250, 500, 1 en 2 mg / ml, wat zich manifesteert door 96 uur incubatie.

2. Het effect van het extract op MCF-7-cellen is dosisafhankelijk.

3. Het remmende effect van het extract van T. canis op de proliferatieve activiteit van de kweek van Caco-2-cellen manifesteert zich in mindere mate en in hogere concentraties van 500, 1 en 2 mg / ml.

4. De kweek van MCF-7-cellen is gevoeliger voor het antiproliferatieve effect van het extract van T. canis vergeleken met Caco-2-cellen in een in vitro model na 96 uur kweken.

1. Kang Y.J., Jo Jo, Cho M.K. et al. Van Thrichinella spiralis-infectie van B16-F10-melanoomcellen // Dierenarts. Parasitol. - 2013. - V. 196 (1-2). - P. 106-113.

2. Molinari, J.A., Ebersole, J.L. Antineoplastische effecten van langdurige Trichinella spiralis-infectie op B-16-melanoom // Int. Arch. Allergie Appl. Immunol. - 1977. - V. 55 (1-4). P. 444-448.

3. Pocock D., Meerovitch E. Het anti-neoplastische effect van de trichinelose in syngene muizenmodel // Parasitology. - 1982. - V. 84 (punt 3). - P. 463-473.

4. Vasilev S., Ilic N., Gruden-Movsesijan A. et al. Necrose en apoptose bij Trichinella spiralis-gemedieerde tumorreductie // Cent. Eur. J. Immunology. - 2015. - V. 40 (1). - P. 42-53.

5. Wang X.L., Fu B.Q., Yang S.J. et al. Trichinella spiralis is een potentieel antitumormiddel // Dierenarts. Parasitol. - 2009. - V. 159 (3-4). - P. 249-252.

6. Wang X.L., Liu M.Y., Sun S.M. et al. Een antitumoreiwit geproduceerd door Trichinella spiralis induceert apoptose in menselijke hepatoom H7402-cellen // Vet. Parasitol. - 2013. - V. 194 (2-4). - P. 186-188.

1. middel antiproliferatieve activiteit, die een eiwitextract Toxocara canis, verkregen door extractie gomogentata helminten T. Canis fosfaatgebufferde zoutoplossing bij pH 7,2 in een verhouding van 1:10 gedurende 36-48 uur bij 4 ° C, en centrifugatie.

2. Werktuig volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het in vitro antiproliferatieve activiteit op modellen van humane tumorcellen heeft.

Het antiproliferatieve effect is

Sommige functies liggen ten grondslag aan de antiproliferatieve werking van interferonen. De meeste componenten van de anti-infectieuze activiteit van interferon spelen een rol bij hun antitumoreffect.

Aangehaald verhoogde synthese Mx-eiwitten, remmers van mRNA transcriptie enzymen 2'-5'-oligoadenylaatsynthetase systeem remmen translatie vereist voor de synthese van cellulaire eiwitten, tryptofaan uitputting van intracellulaire opslagplaatsen, wat leidt tot verstoring van de eiwitsynthese in een cel, van groot belang bij de antiproliferatieve, inclusief antitumor, interferon-actie.

Significantie level verandert 2'-5 'synthetase antiproliferatieve werking van IFN-een gevalideerde klinische waarnemingen: toont de correlatie graad met toenemende mate van enzymtherapie werkzaam is bij patiënten met intestinale carcinoïde en lymfomen.

Niet minder belangrijk in de antiproliferatieve werking van interferon is een ander mechanisme. Het signaal dat door binding van interferon aan de interferonreceptor naar de celkern wordt overgedragen, vermindert de expressie van proto-oncogenen, in het bijzonder c-tus en c-fos, die betrokken zijn bij de regulatie van celgroei.

Onderdrukking van de activiteit van deze proto-oncogenen leidt tot blokkering van de celcyclus, accumulatie van cellen in de GO-fase, met als gevolg dat de proliferatie vertraagt ​​of zelfs stopt, omdat de meeste cellen apoptose ondergaan. Dit proces is reversibel en enige tijd na de verwijdering van interferon kan celproliferatie met dezelfde snelheid herstellen, terwijl de expressie van oncogenen, onderdrukt in de aanwezigheid van interferon, na verwijdering uit het lichaam ook op hetzelfde niveau kan herstellen.

Evenzo veroorzaakt het effect van interferonen in de meeste gevallen geen onomkeerbare processen in cellen, waarvan het genotype onder invloed van de integratie van het virusgenoom in het DNA van de cel wordt veranderd. Langdurig gebruik van interferon in deze gevallen kan het normale celfenotype herstellen, maar het staken van de werking van interferon leidt weer tot de ontwikkeling van een tumor.

Remming van angiogenese, vasculaire groei en neoplasma, die een belangrijke rol speelt bij tumorgroei en metastase, is belangrijk in de antiproliferatieve, in het bijzonder antitumor, werking van interferonen. Talrijke studies naar het mechanisme van de therapeutische werking van IFN-a bij hemangiomatose hebben aangetoond dat interferonen de proliferatie van endotheelcellen en gladde spiercellen remmen, fibroblastgroeifactor en angiogenine remmen (vasculaire groeifactor en neoplasma), de productie van collageen verminderen.

Er werd aangetoond dat IL-12, dat een uitgesproken anti-angiogeen effect heeft, de vorming van IFN-y en zijn effectoreiwit p10 versterkt.

Op celculturen van gezonde donoren en patiënten met acute leukemie, is aangetoond dat IFN-a de activiteit van telomerase, het enzym dat de lengte van telomeren die nodig zijn voor celdeling, aanzienlijk remt. Er zijn herhaaldelijk bevestigd bewijs dat IFN-y de expressie van het FAS-antigeen en caspase 3 verhoogt en daardoor apoptose in beenmerg (CD34 +) voorlopers induceert.

Er zijn aanwijzingen dat IFN-a op dezelfde manier werkt en het effect van het apoptotische effect wordt versterkt door de fragmentatie van het anti-apoptotische Bax-molecuul dat hierdoor wordt veroorzaakt. IFN-a verbetert ook de afgifte in het bloed van de tumornecrosefactor, die gericht is op de afbraak van tumorcellen.

Uit de tot nu toe beschikbare gegevens is het dus duidelijk dat interferonen antiproliferatief zijn, inclusief antitumor, actie, geïmplementeerd op verschillende, vaak onderling gerelateerde manieren. In het antitumoreffect van interferonen zijn zowel de beschreven werkwijzen van directe effecten op de tumor en indirecte antitumormechanismen geassocieerd met een toename in de activiteit van macrofagen, activering van T-cellen, natuurlijke killers en een toename in antilichaamproductie belangrijk.

Het antiproliferatieve effect is

Instituut voor Epidemiologie en Microbiologie. NF Gamalei RAMS, Moskou

Antiproliferatief effect

Zeer gevoelig voor het AP-effect van tumorcellen, gekenmerkt door continue ongecontroleerde groei, dus het AP-effect gaf hoop voor de antitumoractiviteit van IFN. Vele honderden onderzoekers werkten aan de studie van dit probleem, waarbij ze vaak deze twee concepten combineerden, wat klinisch verkeerd is.

Bij gebruik van IFN in hoge doses (> 1 miljoen IE), komt het AP-effect voornamelijk tot uiting in cytopenie. De cellen van het hematopoietische systeem zijn zeer gevoelig voor IFN. Dit remt zowel de groei als het vermogen om te koloniseren in het beenmerg en de milt. Reproductie van door mitogen gestimuleerde lymfocyten wordt ook onderdrukt. In de regel is de lymfoïde reeks gevoeliger voor IFN dan myeloïde. Het minst gevoelig voor de werking van interferon-erytropoëse.

Tegelijkertijd zorgde IFN voor hoge dagelijkse doses (3-15 miljoen IE) voor cytoreductie (afname van het aantal circulerende tumorleukocyten) van gemiddeld 97,4x10 9 tot 4,2x10 9 / l met een afname in de grootte van de milt [28] bij patiënten chronische myeloïde leukemie. Het effect hing af van de toegediende doses van het medicijn (dat wil zeggen bereikt door het AP-effect), maar aanvullende maatregelen waren nodig om het antitumoreffect en de genezing te bereiken, waaronder beenmergtransplantatie.

AP-effect is omkeerbaar. Na het stoppen van de introductie van IFN hematopoiesis is volledig hersteld. De groei van tumorcellen wordt ook hervat. Om het AP-effect in het lichaam te behouden, is constante invoer van hoge doses IFN vereist.

Het AP-effect is zeker geassocieerd met de activering van 2 ', 5'-oligo (A) synthetase, omdat in verschillende culturen er een parallellisme is tussen het niveau van 2', 5'-oligoadenylaten in het cytoplasma en de mate van onderdrukking van proliferatie. Deze relatie is nog niet duidelijk. Eén ding staat buiten kijf dat de moleculaire mechanismen van de ontwikkeling van AB- en AP-toestanden in daaropvolgende stadia anders lijken te zijn. Bijvoorbeeld, choleratoxine, het veranderen van de fysisch-chemische toestand van het cytoplasmatische membraan en het niveau van cAMP remt de ontwikkeling van de AV-toestand, maar niet het AP-effect [29]. Vergelijkbare actie heeft oubain, puromycine en cycloheximide in bepaalde concentraties.

Cellen van de huid-musculaire, mesenchymale en epitheliale weefsels in het lichaam zijn meestal resistent tegen de AP-werking van IFN. Het meest gevoelige model dat wordt gebruikt om het AP-effect te meten, wordt beschouwd als getransformeerde Daudi-lijn-B-lymfocyten die zijn geïsoleerd van patiënten met Burkitt-lymfoom. In een retrospectieve analyse kunnen we concluderen dat, door antiproliferatieve potentiaal, de meest actieve IFN-α is. Het is vaak 10-20 keer effectiever dan IFN-α. De activiteit van IFN- en IFN- varieert afhankelijk van het type cellen, maar vaker heeft IFN-voordelen voor de huid-spiercellen. Op antiproliferatief potentieel is de volgende rij van IFN geldig: IFN-> IFN-> IFN-. Er moet aan worden herinnerd dat het AP-effect intrinsiek is voor alle IFN en dat het zich altijd klinisch manifesteert wanneer het in hoge doses wordt gebruikt. Omdat het klinische syndroom meestal reversibele cytopenie is, is het raadzaam om IFN te gebruiken in dagelijkse doses van> 1 miljoen IE met hematopoietische activatoren, bijvoorbeeld met leukinferon.

AP-effect komt alleen tot uiting in de interactie van IFN met specifieke receptoren, gevolgd door een diepe schending van de synthese van macromoleculen. Celmutanten die hun receptor hebben verloren, worden resistent tegen zowel antivirale als antiproliferatieve effecten. Er moet ook rekening worden gehouden met het feit dat het antiproliferatieve effect bij lage doses cytostatisch van aard is: de celgroei is volledig hersteld na het verwijderen van IFN, hoewel dit tijd kost - ten minste 24 uur [30, 31].

Een overzicht van talrijke waarnemingen [32] leidde tot de conclusie dat het antiproliferatieve effect van IFN met name uitgesproken is tijdens de voorbereidingsperiode (fase G0, G1, G2), daarom zijn cellen waarin deze periode kort is en DNA-synthese (S-periode) intens is, of ze bevinden zich in de fase van mitose (M-fase), minder gevoelig.

Het is bekend dat er een basisch niveau van 2 ', 5'-oligoadenylaat in het cytoplasma is, dat noodzakelijk is voor proliferatie. Echter, met de introductie van IFN in de meeste weefsels, kan hun niveau met 10-15 keer toenemen. Dus bij muizen die IFN- / kregen, begint het niveau van 2 ', 5'-oligoadenylaten in de milt, longen, lever en, in mindere mate, in de thymus en de hersenen in 2-5 uur te stijgen [33]. In dit geval verschijnen bijvoorbeeld nieuwe eiwitten met moleculaire massa's van 15, 16, 20, 53, 79, 87 en 105 kDa in het cytoplasma van Daudi en neemt het niveau van slechts één eiwit af - 23 kDa. In de mutante cellen die resistent zijn tegen AP-actie van dezelfde lijn, is slechts één eiwit, 15 kDa, duidelijk niet geïnduceerd. Het niveau van andere eiwitten is aanzienlijk verminderd, maar ze worden nog steeds gedetecteerd. Tegelijkertijd werd de expressie van het c-myc cellulaire proto-oncogen ook onderdrukt door IFN [34].

Tot op heden is het bekend dat er in het menselijke genoom ongeveer 40 cellulaire proto-oncogenen zijn die alleen in embryonale cellen tot expressie worden gebracht, maar laag-actief in volwassen cellen. Volgens gepubliceerde gegevens bijvoorbeeld, accumuleert in de spoorachtige kikker in het proces van rijping van het ei in elk van hen tot 8 miljoen exemplaren van het c-myc-gen, in het stadium van volwassen spawn, is hun niveau ook erg hoog - 5 miljoen exemplaren, maar na bemesting worden ze verdeeld tijdens deling en elke kikkervetcel bevat al slechts 20-50 kopieën van c-myc, d.w.z. ongeveer hetzelfde als een persoon.

In het menselijk genoom komt c-myc weinig tot expressie in rijpe cellen. Tijdens de embryogenese, maar ook tijdens chirurgische ingrepen, vinden herstel- en regeneratieprocessen van een andere genese, c-myc en andere groei-oncogenen c-ras en c-abl plaats. Deze proto-oncogenen zijn absoluut noodzakelijk voor het begin van proliferatie. Activatie van groei-proto-oncogenen stimuleert cellen om over te schakelen van fase G0/ G1 naar volgende stadia van de celcyclus - S, G2 en mitose (M). De weefselgroei is echter genetisch bepaald en strikt gereguleerd met de deelname van groeifactoren, contactinhibitie en apoptosefactoren [22]. De belangrijkste regulator van expressie van groei-proto-oncogenen is het p53-eiwit, waarvan het gen ruim vertegenwoordigd is in het zoogdiergenoom.

In cellen van het hematopoietische systeem leidt expressie van het p53-gen tot een fysiologisch fenomeen - geprogrammeerde dood - apoptose. Voorkomt dit eiwit bcl-2 gen. Aldus creëert een toename in de expressie van groei-proto-oncogenen omstandigheden voor ongecontroleerde groei en maligniteit (in het bijzonder met puntmutaties die het proto-oncogen in een oncogen transformeren, of wanneer het in het virale genoom wordt geïncorporeerd en door een virale versterker wordt beïnvloed). De afname in hun expressie onder de werking van IFN of p53 (Rb-eiwit is ook betrokken, wat hier niet wordt beschouwd) remt groei en proliferatie. Maar deze processen zijn natuurlijk niet beperkt tot, in feite zijn ze veel gecompliceerder.

Bij tumortransformatie moet activering van c-myc en andere oncogenen in de groei plaatsvinden. Interessant is dat om het getransformeerde fenotype te behouden, constante expressie van oncogenen en de daaruit volgende aanwezigheid van oncoproteïnen in het cytoplasma noodzakelijk is. De introductie van oncoproteïnen in een normale cel leidt tot het verschijnen van fenotypische tekens van transformatie, die beginnen te verdwijnen als de oncoproteïnen degraderen. De introductie van antilichamen tegen oncoproteïnen in het cytoplasma van getransformeerde cellen leidt ook tot een tijdelijk herstel van fenotypisch normale cellen. Aldus kan een getransformeerde cel die zijn specifieke functies (differentiatie) heeft verloren en wordt gekenmerkt door ongecontroleerde groei, terwijl de expressie van groei-oncogenen onder invloed van IFN wordt onderdrukt, worden teruggebracht naar de fenotypische norm. Het is uiterst belangrijk om elke dokter te kennen.

Er zijn verschillende manieren om cellulaire proto-oncogenen te activeren - puntmutaties, genomische amplificatie, accumulatie van transcripten of ten slotte, gen-translocatie, beschreven voor chronische myeloïde leukemie (c-abl 9:22 gen) of Burkitt's lymfoom (c-myc gen 8:14) [35]. Het getranslokeerde gen wordt beïnvloed door de nieuwe promoter en kan worden geactiveerd. Oncogene virussen die deze oncogenen dragen (meestal met kleine veranderingen) en in staat zijn om ze in het genoom te integreren, kunnen een belangrijke rol spelen. Het lijdt echter geen twijfel dat puntmutaties in het p53-gen, die worden gevonden in ten minste 50% van de tumorcellen die kenmerkend zijn voor de VS en Engeland, het meest waarschijnlijk zijn voor menselijke tumoren [36]. Er wordt aangenomen dat het feit van mutatie van het p53-gen, dat de controle over de activiteit van groei-oncogenen vermindert, alleen voorwaarden creëert voor tumorgroei. Hun klinische manifestaties moeten worden verwacht in het interval tot 30 jaar, wanneer andere signalen worden ingeschakeld of de mechanismen van antitumorimmuniteit verzwakken.

Het vermogen van IFN om antitumorprocessen te voorkomen valt niet te ontkennen, alleen al door het effect op de expressie van oncogenen in de groei. Maar ze worden helemaal niet bestudeerd.

Gebruikmakend van het voorbeeld van het c-myc-gen in Daudi-cellen voor de eerste keer in 1984, werd aangetoond dat IFN-type I kan worden beschouwd als een negatieve regulator van de expressie van groei-oncogenen, wat het AP-effect in normale weefsels ten minste gedeeltelijk verklaart [37]. Later werd dit effect ook waargenomen met een ander c-Ha-ras groei-oncogeen. Het effect wordt vaker gerealiseerd op het niveau van oncogen-translatie (eiwitniveau). Met behulp van het c-myc-voorbeeld werd aangetoond dat het p62 kDa DNA-bindende eiwit, dat een product is van c-myc, nodig is voor de ligatie van Okazaki-DNA-fragmenten in een enkele helix. De onderdrukking ervan met de introductie van IFN voorkomt de synthese van nieuw DNA, gevolgd door remming van proliferatie.

Er zijn echter ook andere voorbeelden van replicatieremming zonder een uitgesproken effect op de expressie van groei-proto-oncogenen (cellen van de monocytenreeks I-937, HL-60, Friend's erythroleukemia, Balb c / 3T3). Het systeem van 2 ', 5'-oligo (A) synthetase-RNase L kan een belangrijke rol spelen in dit proces, wat zorgt voor de snelle afbraak van nieuw gesynthetiseerd mRNA dat nodig is voor proliferatie [38].

Immunomodulerende effecten

Gedurende bijna een heel decennium zijn preparaten van IFN gebruikt als antivirale middelen die de cel tegen virale infectie kunnen beschermen zonder de deelname van immuuneffectoren. Hoewel al een aantal klinische observaties, bijvoorbeeld de stimulatie van herstelprocessen bij wonden, waaronder die met een hoge besmetting [39, 40], en uitgebreide brandwonden [41], niet in het algemene schema pasten en nieuw denken nodig had [2].

Grote belangstelling werd getrokken door een onderzoek uitgevoerd in het Primaatcentrum in Holland, waaruit bleek dat apen die zijn geïnfecteerd met een zeer gevoelige stam van het vacciniavirus of zijn mutant, resistent zijn tegen IFN, wat praktisch niet haalbaar is in het lichaam (> 10 duizend IE), met daaropvolgende Bij de behandeling van IFN waren er geen significante verschillen in de klinische dynamiek en intensiteit van de ontwikkelde immuniteit. In beide gevallen heeft het IFN virale schade voorkomen. Dit wees op de dominante rol van immuuneffectoren geactiveerd door IFN in de processen van eliminatie van het virus en daarop volgend klinisch herstel.

Vanuit het standpunt van vandaag kan worden gesteld dat de activering van niet-specifieke cellulaire immuunresponsen en de regulatie van effectoren in de immuunrespons kennelijk de belangrijkste functie van IFN in het lichaam is [4]. Bij interactie met de ziekteverwekker worden IFN's geproduceerd door macrofagen en lymfocyten, een ontstekingsreactie die leidt tot de vernietiging van de ziekteverwekker in de focus met minimale schade aan normale weefsels. Het is bekend dat normale gezondheid voornamelijk wordt ondersteund door niet-specifieke cellulaire immuniteitsreacties die worden uitgevoerd door de bekende triade van immuun-effectoren: macrofaag, T-helper-lymfocyt en neutrofiele fagocyt. De macrofaag wordt in dit geval beschouwd als een universele antigeenpresenterende cel (APC), die het bewerkte antigeen aan de T-lymfocyt presenteert, samen met activerende cytokinen. De rol van de AIC wordt ook uitgevoerd door dendritische cellen en Langerhans-cellen (huid). Maar de essentie van het fenomeen verandert niet. De AIC legt een verwerkt antigeen in complex op met het belangrijkste histocompatibiliteitscomplex (MHC) klasse 2 (virale en tumorantigenen in complex met MHC klasse 1), dat moet worden herkend door de T-celreceptor (TCR) van SD3 + lymfocyten. Het is bekend dat de immunogeniciteit van het verwerkte antigeen ongeveer 10.000 keer toeneemt, en 100 complexen van klasse 2 antigeen + MHC kunnen een interactie aangaan met 18.000 TCR [42]. Dit karakteriseert de effectiviteit van immuunherkenning.

De rol van een antigeen kan worden uitgevoerd door een ziekteverwekker, die eerst wordt gedood door peroxidedoderingsreacties en vervolgens wordt geïnternaliseerd. Daaropvolgende niet-specifieke responsreacties worden getoond in Fig. 1. Onder invloed van het antigeen moet de macrofaag worden geactiveerd, waarbij autocriene INF-a en IL-6 worden geproduceerd. MHC klasse 2-antigenen worden niet constant tot expressie gebracht op de macrofaag en hun uiterlijk wordt gestimuleerd door IFN-a en IL-4. Het proces wordt onderdrukt door de transformerende groeifactor TGF-a, die ook door macrofagen kan worden geproduceerd. De bron van IFN-zijn altijd geactiveerde T-lymfocyten.

Direct contact van de macrofaag en de T-helper lymfocyt, die wordt uitgevoerd door de structuren van klasse 2 antigeen + MHC en TCR, wordt ook aangevuld door de transmembraan glycoproteïnen ICAM. Dit verschaft een beperking van de immuunrespons, maar is niet voldoende om T-lymfocyten te activeren. Een tweede signaal is nodig in de vorm van een complex van cytokinen geproduceerd door geactiveerde macrofagen: deze zijn in de eerste plaats IFN-a, evenals IL-1, IL-6, IL-12, TNF-a, die een interactie aangaan met de overeenkomstige receptor op de T-helpercel.

Geactiveerde T-helper lymfocyt, ondersteunt macrofagen, releases cytokines zoals IFN- (het stimuleren van de expressie van MHC klasse 2) en IL-4 (activeert de klasse 1 MHC-genen), MIF en LIF die macrofagen in de bron van ontsteking en koloniestimulerende behouden factoren (CSF) - M-CSF en GM-CSF. Vanwege het wederzijds gebalanceerde effect van geactiveerde macrofagen en T-helper lymfocyten wordt hun activeringstoestand gehandhaafd en amplificatie van de immuunrespons bereikt door versnelling van de differentiatie van macrofagen van vroege monocyt / macrofaag voorlopers.

Activatiesignalen van macrofagen (IFN-, IL-1, TNF-a, IL-8, G-CSF en GM-CSF) en T-helper lymfocyten (IFN-, IL-3) worden waargenomen door neutrofiele fagocyten, die bijdragen aan hun differentiatie en stimulerende fagocyten -functie. Dit verhoogt alle parameters van fagocytose - het aantal gerijpte gesegmenteerde neutrofielen, de vorming van peroxiden, de fagocytische index en het aantal, en ook (het belangrijkste) de voltooiing van fagocytose. We kunnen zeggen dat deze cirkel sluit.

Het belangrijkste negatieve signaal voor het gehele systeem is IL-10, dat door zowel macrofagen als T-lymfocyten kan worden geproduceerd. Maar de belangrijkste regulerende rol in dit proces behoort blijkbaar tot T-lymfocyten. Specifieke antilichamen mogen niet deelnemen aan deze reacties.

De volledige reeks cellulaire antigeeneliminatiereacties met macrofagen (of andere APC's), T-lymfocyten en neutrofiele fagocyten, waarbij er geen noodzaak is voor T-lymfocytproliferatie en -differentiatie, kan worden beschouwd als de eerste fase van de immuunrespons. Het is nauw verwant aan het volgende - de tweede fase, die begint op het niveau van prolifererende T-lymfocyten en de hoofdrichting bepaalt in de daaropvolgende reacties van het organisme op het pathogeen, wanneer cellulaire (of in het bijzonder HRT) of humorale routes van immunogenese beginnen aan te zetten.

De eerste fase van de immuunrespons werkt constant en is blijkbaar de belangrijkste onmiddellijke reactie van het lichaam met lage pathogenen. Het schakelt onmiddellijk in na herkenning van het antigeen. De deelnemers zijn immuun-effectoren die op dit moment gedifferentieerd zijn, maar aan de andere kant is zij het die de basis legt voor daaropvolgende immuunreacties. De beschermende rol van de reacties van de eerste fase van de immuunrespons is extreem hoog en lijkt door de arts te worden onderschat.

Inloggen op uw account

AN Moses, Ph.D. dierenarts. Sciences, LLC "BIOTECH-FARM", St. Petersburg

PI Baryshnikov, Dr. wet. Wetenschappen, professor, Altai AGAU, Barnaul

De familie van cytokinen omvat interferonen (hierna aangeduid als IFN), interleukinen, chemokinen, groei- en koloniestimulerende factoren, die polypeptidemoleculen van het immuunsysteem signaleren. Met een breed spectrum van biologische activiteit bepalen ze niet alleen een adequaat niveau van de immuunrespons, maar reguleren ze ook de interactie van de belangrijkste integratiesystemen van het lichaam - het zenuwstelsel, het immuunsysteem en het endocriene.

De structuur en het werkingsmechanisme van de meeste cytokinen zijn tamelijk volledig gekarakteriseerd. Door het gebruik van methoden van genetische manipulatie en moderne biotechnologie worden momenteel veel cytokinen geproduceerd in de vorm van recombinante preparaten die identiek zijn aan endogene moleculen, in een hoeveelheid die voldoende is voor hun klinische gebruik.

Veel micro-organismen - bacteriën, gist, virussen - worden gebruikt als ontvangers van vreemd genetisch materiaal om recombinante stammen te verkrijgen - producenten van biotechnologische producten. Aldus verkregen recombinante stammen van E. coli, die interferonen, insuline, groeihormonen, een verscheidenheid aan antigenen produceren; stammen van B. subtilis die interferon produceren; gist dat interleukines produceert, etc.

Het gebruik van recombinante cytokinen, die een adequate en gerichte medische correctie van immuundisfuncties verschaffen, verhoogt de effectiviteit van immunotherapie en behandeling in het algemeen. Cytokinen die in het lichaam worden ingebracht, compenseren de tekortkoming van endogene regulerende moleculen en geven hun effecten volledig weer. Dit is vooral belangrijk in omstandigheden van ernstige of chronische pathologie, wanneer het gebruik van traditionele immunomodulatoren of inductoren van cytokinesynthese nutteloos is vanwege de uitputting van de compenserende vermogens van het immuunsysteem. Momenteel is therapie met recombinante cytokinen een van de meest veelbelovende en immer uitbreidende gebieden van immunofarmacologie.

Dus antivirale en antiproliferatieve effecten hebben interferonen van het eerste type (hierna - IFN-a, IFN-p). Een speciale plaats in het licht van moderne ideeën over de moleculaire mechanismen van immuunreacties behoort tot interferon-gamma (hierna - IFN-γ) - het regulerende cytokine van de immuunrespons.

Op basis van recombinante interferonen hebben verschillende bedrijven geneesmiddelen ontwikkeld voor dieren en mensen, die worden gebruikt voor het behandelen en voorkomen van infectieziekten, voornamelijk virale etiologie.

Recombinant IFN in het lichaam van dieren en mensen in de behandeling en preventie van ziekten van verschillende etiologieën verschaffen adequate en gerichte medische correctie van immuundisfuncties, het aanvullen van de deficiëntie van endogene regulerende moleculen en het volledig reproduceren van hun effecten. Hoge immunocorrectie-efficiëntie, voorspelbaarheid en selectiviteit van hun werking zijn te wijten aan de aanwezigheid van specifieke receptoren op de cellen en het bestaan ​​van natuurlijke mechanismen voor hun eliminatie. Farmaceutische preparaten op basis van recombinant IFN zijn krachtige agentia van pathogenetische immunogerichte therapie en hebben zowel een direct vervangend effect als verschillende inductieve effecten. Momenteel worden ze veel gebruikt bij de behandeling van infectieuze, oncologische en sommige andere dierziekten.

Interferon classificatie

Interferonen (IFN, IFN) is de algemene naam waaronder op dit moment een aantal biologisch actieve eiwitten of glycoproteïnen wordt gecombineerd met dezelfde eigenschappen die door de cellen van het lichaam worden gesynthetiseerd tijdens een beschermende reactie als reactie op de invasie van vreemde middelen - een virale infectie of een antigeen effect. Dankzij interferonen worden cellen immuun voor het virus.

Interferonen zijn een multigene familie van induceerbare cytokines met diverse functies, waaronder antivirale, antiproliferatieve, antitumor- en immunomodulerende.

Momenteel zijn meer dan 20 IFN's bekend, verschillend qua structuur, biologische eigenschappen en het overheersende werkingsmechanisme. IFN is onderverdeeld in drie soorten:

• Type I, bekend als viraal interferon, omvat IFN-α (leukocyten, gesynthetiseerd door geactiveerde monocyten en B-lymfocyten), IFN-β (fibroblastisch materiaal, gesynthetiseerd door fibroblasten, epitheelcellen en macrofagen) en andere IFN's. Het eerste type (IFN-α, IFN-β) wordt voornamelijk gekenmerkt door antivirale en antiproliferatieve effecten, en in mindere mate - immunomodulerende effecten. Ze worden direct na een ontmoeting met de ziekteverwekker geproduceerd - ze worden geïnduceerd in het proces van virale infectie, hun actie is gericht op het lokaliseren van de ziekteverwekker en het voorkomen van de verspreiding ervan in het lichaam. De IFN-α en -β inductoren zijn virussen, RNA (vooral dubbelstrengs), lipopolysacchariden (LPS), componenten van sommige bacteriën. Onder virussen zijn de sterkste interferoninductoren RNA-genoom. DNA-virussen zijn zwakke inductoren (met uitzondering van pokkenvirussen).

• Type II, bekend als immuun, omvat IFN-γ (gesynthetiseerd door geactiveerde T-lymfocyten en NK-cellen). Het belangrijkste effect van interferonen van het tweede type (IFN-γ) is deelname aan immuniteitsreacties. Het begint te worden geproduceerd in de volgende stadia van het infectieuze proces door reeds gesensitiseerde T-lymfocyten en neemt actief deel aan de cascade van een specifieke immuunrespons. Interferonogene stoffen, antigenen, T-mitogenen en sommige cytokines zijn in staat IFN-γ-productie te induceren. De doelcellen voor IFN-y zijn macrofagen, neutrofielen, natuurlijke killercellen, cytotoxische T-lymfocyten, die receptoren op hun oppervlak hebben voor IFN-y. De productie van IFN-y staat onder controle van cytokinen. IL-12 en IL-18 versterken de expressie ervan, en IL-2 draagt ​​bij aan de functie van CD4 + -lymfocyten, waardoor de productie van IFN-y wordt geactiveerd. De achtergrondhoeveelheid van IFN-γ is altijd aanwezig in het lichaam, zelfs als er geen infectie is: bijvoorbeeld, de analyse van interferon-status toont bij gezonde mensen en dieren altijd een definieerbare hoeveelheid IFN in het bloed, wanneer gestimuleerd of geïnfecteerd, neemt het vele malen toe. Tijdens herpesinfectie en in de laatste stadia van het tumorproces, neigt de hoeveelheid IFN-γ naar nul, omdat het herpesvirus en kankercellen eiwitten produceren die de synthese van IFN-γ blokkeren. Daarom zijn de interferon-inductors met herpesvirusinfectie en kanker zinloos, ze moeten van buitenaf in het lichaam worden geïntroduceerd.

• Type III werd later ontdekt op type I en type II; informatie daarover suggereert het belang van IFN type III bij sommige soorten virale infecties.

Virale interferonen (IFN-α / β) worden geïnduceerd tijdens virale infectie en de synthese van type II interferonen (IFN-γ) wordt geïnduceerd door mitogene of antigene stimuli. De meeste soorten met virus geïnfecteerde cellen zijn in staat om IFN-α / β in celkweek te synthetiseren. Daarentegen wordt IFN-y alleen gesynthetiseerd door enkele cellen van het immuunsysteem, waaronder natuurlijke killercellen (NK), CD4 T-cellen en CDS cytotoxische suppressorcellen.

Antiviraal effect van interferon

Interferonen werken niet rechtstreeks op het virus. Onder hun invloed wordt de cel resistent tegen infectie. Interferonen vormen de eerste verdedigingslinie tegen een virale infectie, aangezien deze onmiddellijk na contact met het virus worden geproduceerd. Tegelijkertijd is de ernst van de respons recht evenredig met de infectiedosis.

Sommige virussen kunnen het antivirale effect van IFN blokkeren. Adenovirussen produceren bijvoorbeeld specifiek RNA, dat de activering van proteïnekinase voorkomt.

Binding van IFN aan de receptor induceert drie gelijktijdig optredende processen in de cel, die eindigen:

• activering van latente endoribonuclease, leidend tot de vernietiging van viraal RNA;

• onderdrukking van de synthese van virale boodschapper-RNA;

• onderdrukking van de synthese van virale envelopeiwitten.

Deze mechanismen implementeren integraal het antivirale effect, wat leidt tot de onderdrukking van virale replicatie.

Immunomodulerende effecten van interferon

IFN's hebben niet alleen antivirale maar ook immunomodulerende effecten als gevolg van het effect op de expressie van de receptoren van het belangrijkste histocompatibiliteitscomplex (MHC). IFN verhoogt de expressie van eerste klas MHC-moleculen op alle soorten cellen, waardoor de herkenning van geïnfecteerde cellen door cytotoxische T-lymfocyten (CTL) wordt verbeterd. Bovendien verhoogt IFN-y de expressie van MHC klasse 2-moleculen op antigeenpresenterende cellen, wat resulteert in een verbeterde presentatie van virale antigenen tegen CD4 + -lymfocyten en natuurlijke killercellen (NK-cellen) worden geactiveerd. IFN's stimuleren ook fagocytose.

De regulatie van de immuunrespons door cytokinen, inclusief interferonen, vindt plaats volgens het relaisprincipe, het effect van cytokine op de cel veroorzaakt de vorming van andere cytokinen (cytokine cascade).

Antiproliferatief effect van interferon

Het antiproliferatieve effect van IFN wordt verklaard door de volgende mechanismen:

• activering van cytotoxische cellen;

• verhoogde expressie van tumor-geassocieerde antigenen;

• modulatie van antilichaamproductie;

• remming van de werking van tumorgroeifactoren;

• remming van de synthese van RNA- en tumorceleiwitten;

• vertragen van de celcyclus met een overgang naar de rustfase;

• stimulatie van tumorcellen om te rijpen;

• herstel van restrictieve controle over proliferatie;

• remming van de vorming van nieuwe bloedvaten in de tumor;

• biomodulatie van cytostatische activiteit: een verandering in metabolisme en een afname in klaring;

• het overwinnen van resistentie tegen geneesmiddelen als gevolg van remming van multi-drug-resistentiegenen.

Antibacterieel effect van interferon

In de afgelopen jaren is aangetoond dat IFN ook een antibacterieel effect heeft, dat is gebaseerd op het vermogen van IFN om de activiteit van bepaalde enzymen in de aangetaste cel te induceren.

Bovendien bestaat de antibacteriële rol van IFN-y uit de activering van macrofagen die pro-inflammatoire cytokinen produceren, evenals actieve vormen van zuurstof en stikstof, prostaglandinen. Deze factoren dragen bij tot de ontwikkeling van het ontstekingsproces dat leidt tot de dood van bacteriën.

Aldus zijn alle interferonen een groep polyfunctionele eiwitfactoren met een uitgesproken antiviraal en antitumoreffect van verschillende gradaties. IFN-α heeft de sterkste antivirale activiteit van alle interferonen en IFN-γ heeft een meer uitgesproken antiproliferatieve activiteit. Alle interferonen hebben een immunoregulerend effect van verschillende ernst (IFN-y heeft het maximum) - ze verhogen de activiteit van macrofagen, T-lymfocyten en NK-cellen.