Veterinaire technologie

Eten

Principe. Eiwitten reageren in een alkalisch milieu met kopersulfaat; tegelijkertijd worden de verbindingen gevormd in violette kleur gevormd.
Reagentia. 1. 0,9% natriumchloride-oplossing.
2. 0,2 n. (0,2 mol / l) oplossing van bijtende soda, vrij van koolstofdioxide. 8 t substantie wordt in een maatkolf van 1 liter gebracht en op het merkteken uitgegoten met gekookt gedestilleerd water of bereid uit 1N. (mol / l) natronloogoplossing: 20 ml 1 n. NaOH-oplossing wordt aangevuld tot 100 ml met gekookt gedestilleerd water.
3. Biuret-reagens belangrijkste. 4,5 g segnetova zout (KNaC4H4O6) opgelost in een maatkolf van 100 ml in 40 ml van 0,2 n. bijtende soda-oplossing. Na oplossen worden 1,5 g kopersulfaat (CuSO4 * 5H2O) en 0,5 ton kaliumjodide (KI) toegevoegd. Roer tot opgelost en breng aan tot 100 ml 0,2 N. natriumhydroxide-oplossing. Bewaar in een schaal met donker glas. Reagensrekken. 4. 0,5% oplossing van kaliumjodide in 0,2 n. bijtende soda-oplossing. 2,5 g kaliumjodide wordt in een maatkolf van 500 ml gebracht en aangevuld tot 0,2 n. natriumhydroxide-oplossing. Bewaren in donker glaswerk voor niet meer dan 2 weken.
5. Werkoplossing van biuret-reagens. Meng een deel van de basisbiuret-oplossing (3) met vier delen van een 0,5% waterige oplossing van kaliumjodide (4). Bewaren in een koelkast in een donkere container voor niet meer dan 2 weken.
6. Standaard albumine-oplossing, standaard. 1 g kristallijn serum (uit humaan of runderserum) albumine en 9 ml 0,9% natriumchlooroplossing worden aan de buis toegevoegd. Meng grondig. 1 ml oplossing bevat 0,1 g eiwit. Bewaren in de koelkast. Serumalbumine moet voldoen aan de vereisten van de norm.
Equipment. Foto-elektrische colorimeter; maatkolven.
De loop van de vastberadenheid. Voeg aan 0,1 ml bloedserum 5 ml van de werkoplossing van biuret-reagens toe, meng en vermijd de vorming van Lena. Na 30 minuten (maar niet later dan 1 uur) werd de optische dichtheid van de PEC gemeten in een cuvette met een laagdikte van 1 cm bij een golflengte van 540-560 nm (groenfilter) tegen de controle (5 ml biureet-reagenswerkoplossing en 0,1 ml van 0 9% natriumchloride-oplossing).
De berekening wordt uitgevoerd volgens het kalibratieschema, voor de constructie waarvan de standaard oplossingen worden bereid uit de standaard basisoplossing van 10% eiwit (tabel 5).
5. Bereiding van werkende standaard eiwitoplossingen
Uit elke (van de 4) verdunningen in 5 buizen wordt 0,01 ml albumine-oplossing toegevoegd en behandeld, zoals bloedserum.
Metingen van de optische dichtheid van standaardoplossingen beginnen met de oplossing van de laagste concentratie. Volgens de verkregen gemiddelde gegevens van 5 definities bouwen een kalibratiecurve. De kalibratiecurve wordt periodiek gecontroleerd.
Voorbeeld h a n e en i. 1. Het eiwitgehalte in een standaardoplossing moet ten minste 7% zijn. 2. Wanneer het eiwitgehalte in serum meer dan 10% bedraagt, wordt dit laatste verdund met een fysiologische oplossing van 1: 1, het resultaat wordt gemengd met twee. Methodefout 2%.
Bron: Clinical Laboratory Diagnostics in Veterinary Medicine: Reference Edition / I.P. Kondrakhin, N.V. Kurilov, A.G. Malakhov en drr. -M: Agropromizdat, 1985.-287s.

Laboratoriumdiagnose

Snel zoeken op de site

Delen op sociale netwerken

Lees ons in:

Heb je een fout ontdekt? Selecteer het met de muis en druk tegelijkertijd op Ctrl + Enter Orphus-systeem

Methoden voor de bepaling van totaal eiwit in serum

Referentiewaarden van de totale eiwitconcentratie in serum - 65-85 g / l

2. Bepaling van de serum specifieke dichtheid

3. Gewicht (gravimetrisch), waarbij bloedeiwitten worden geprecipiteerd, gedroogd tot constant gewicht en gewogen op een analytische balans.

1. Refractometer IRF - 454 B2M

ontworpen om het eiwit in serum, hersenvocht te bepalen, de concentratie van geneesmiddelen te controleren, de dichtheid van urine te meten.

2. Cobas integra - Totaal eiwit Gen.2

Testprincipe: tweewaardig koper reageert in een alkalische oplossing met eiwitpeptide-bindingen om het karakteristieke purper gekleurde biureetcomplex te vormen.

3. Bepaling van eiwitfracties van bloedserum door celluloseacetaatfilmelektroforese.

De bufferoplossing is ontworpen voor elektroforetische scheiding van serumeiwitten op celluloseacetaatmembranen gevolgd door densitometrische bepaling van eiwitfracties.

Het principe van elektroforetische scheiding van eiwitten is gebaseerd op verschillende snelheden van beweging van serumeiwitmoleculen in een constant elektrisch veld van een bepaalde intensiteit. Gescheiden eiwitfracties worden gekleurd met een kleurstof. De intensiteit van de kleur van de eiwitfracties is evenredig met hun aantal.

Bloedserum, vrij van hemolyse, lipemie en niet-icterisch. De serumproteïnefracties zijn stabiel in een goed gesloten buis bij 18-25 gedurende 8 uur, bij 2-8 gedurende 3 dagen, bij 20 gedurende 1 maand.

1. Voer elektroforese uit

1.1. droge membranen moeten voorzichtig op het oppervlak van de buffer worden geplaatst voor elektroforese, om te voorkomen dat ze snel onderdompelen en weerstaan ​​tot ze volledig bevochtigd zijn. Natte membranen verwijderen voorzichtig tussen vellen dik filtreerpapier en voorkomen dat ze uitdrogen. Voordat de monsters worden aangebracht, is het wenselijk om de pre-phoresis-fase uit te voeren Plaats hiervoor het membraan in een kamer voor elektroforese en schakel de stroom gedurende 10 minuten in de geselecteerde modus in. De pre-phoresis-fase kan worden vervangen door langdurig weken van het membraan in de bufferoplossing (enkele uren).

1.2. gebruik de applicator en breng de geanalyseerde serummonsters aan op een afstand van 2-3 cm van de kathoderand van het membraan. Plaats het membraan in een elektroforetische kamer en sluit de stroom aan.

2. Elektroforegamverwerking

2.1. kleurstof crimson S.

Na het uitschakelen van de stroom, het membraan voorzichtig overbrengen naar de kleurstofoplossing gedurende 3-5 minuten, vervolgens twee keer gedurende 3 minuten in 5-7% oplossing van azijnzuur (tot achtergrond bleken).

1.2. proces elektroforegram met behulp van een scanner en een computerprogramma.

4. Thymol-test

Serum beta-globulines, gamma-globulines en lipoproteïnen precipiteren bij pH 7,55 met thymol-reagens. Afhankelijk van de hoeveelheid en de onderlinge verhouding van eiwitfracties, ontstaat troebelheid tijdens de reactie, waarvan de intensiteit turbidimetrisch wordt gemeten.

Thymol-test is meer geschikt voor de functionele studie van de lever dan colloïd-resistente monsters. Er wordt aangenomen dat het positief is in 90-100% van de gevallen van de ziekte van Botkin (al in de pre-arytische fase en in de anicterische vorm) en in toxische hepatitis. De reactie is positief in het geval van post-hepatitis en post-necrotische, vooral icterische cirrose (in tegenstelling tot andere vormen van cirrose), collageenziekten, malaria en virale infecties. Bij obstructieve geelzucht is het (in 75% van de gevallen) negatief, wat een differentiële diagnostische waarde heeft.

Met obstructieve geelzucht wordt het monster alleen positief als het proces gecompliceerd wordt door parenchymale hepatitis. Voor de differentiatie van obstructieve geelzucht uit parenchymale cellen is het gebruik van de thymol-test met de Burstein-test (voor bèta- en pre-ethylipoproteïnen) van groot belang.

Bij parenchymale geelzucht zijn beide monsters positief, met mechanische geelzucht, de thymol-test is negatief, de Burstein-test is sterk positief.

Totaal eiwit

Alle bekende methoden voor het bepalen van de concentratie van totaal eiwit zijn verdeeld in de volgende groepen:

1. Salpeter, gebaseerd op de bepaling van de hoeveelheid eiwitstikstof, om de concentratie van eiwit te vinden, komt voort uit het feit dat het stikstofgehalte in eiwitten 16% is, dus de coëfficiënt van 6,25 wordt gebruikt. De methode is onnauwkeurig, omdat het stikstofgehalte in verschillende eiwitmoleculen varieert van 14 tot 19%.

2. Methoden die bestaan ​​in het bepalen van de dichtheid van serum - de methode van drijvende druppels, zijn ook onnauwkeurig vanwege het effect op de dichtheid van andere stoffen in het serum.

3. Gewicht (gravimetrisch) - zeer tijdrovend en vereist grote hoeveelheden serum.

4. Refractometrische methoden zijn eenvoudig uit te voeren, maar onnauwkeurig, omdat de brekingsindex ook te wijten is aan mineralen en koolhydraten.

5. Colorimetrisch, op basis van eiwitkleurenreacties:

  • methoden op basis van niet-specifieke binding van de kleurstof (eenvoudige absorptie) zijn vrij gevoelig, maar de mate van binding van de kleurstof hangt af van de individuele eigenschappen van het eiwit (methode met Coomassie brilliant blue).
  • biuret-methode - momenteel de meest gebruikte, is gebaseerd op een specifieke reactie van peptidebindingen met koperionen in een alkalisch medium met de vorming van een paars product. Er zijn verschillende modificaties van deze methode om de intensiteit van de kleur en de stabiliteit ervan te verhogen, de stabiliteit van het reagens te vergroten. Tartraat wordt bijvoorbeeld toegevoegd als een stabilisator, die, wanneer gecomplexeerd met koperionen, precipitatie voorkomt in een alkalisch milieu, KJ voorkomt spontane reductie van alkalisch kopertartraat en precipitatie van koperoxide en verhoogt daarom de stabiliteit van het reagens. De gevoeligheid en specificiteit van de methode hangt af van de gebruikte golflengte: 540-580 nm, 263 nm of 310 nm. De methode wordt als de meest specifieke en nauwkeurige beschouwd, omdat de aanwezigheid van aromatische aminozuren, fenolen en urinezuur geen invloed heeft op de biureetreactie.
  • Lowry-methode - gebaseerd op de vorming van wolfraamblauw en molybdeenblauw uit fosforomolybdeen en fosforwolfraamzouten van het Folin-Chicolte-reagens wanneer ze een interactie aangaan met aromatische aminozuren, voornamelijk tyrosineresten, maar tryptofaan, histidine en cysteïne leveren een zekere bijdrage. De maximale absorptie ligt in het bereik van 745-750 nm. In de samenstelling van het werkende reagens is er een biuret-reagens waarmee u ook peptidebindingen kunt bepalen. Het nadeel van de werkwijze omvat: ten eerste een negatief effect op de ontwikkeling van de kleur van stoffen die worden gebruikt voor de isolatie, zuivering en solubilisatie van eiwitten (detergentia, componenten van buffersystemen, sulfhydryl en andere reductiemiddelen, purines, glycine, sucrose, ammoniumsulfaat, enz.); ten tweede, de afwezigheid van een lineaire afhankelijkheid van de intensiteit van de kleur op de hoeveelheid eiwitstandaard. De methode is gevoeliger dan de biureetmethode, maar de specificiteit is lager, omdat de kleurintensiteit afhangt van de aminozuursamenstelling van het eiwit, evenals van de volgorde van rangschikking van aminozuren en de mate van screening van de functionele groepen.

6. Nephelometrische methoden.

7. Polarimetrische methoden.

8. Spectrofotometrisch, dat bestaat uit het meten van de mate van lichtabsorptie in het ultraviolette gebied bij twee golflengten met verdere berekening door speciale formules (230 en 260 nm, 280 en 260 nm, 235 en 280 nm, 215 en 225 nm, 280 en 205 nm).

Uniforme methoden

De verenigde methoden voor het bepalen van totaal eiwit zijn:

  • in bloedserum - biuret-methode;
  • in urine - semi-kwantitatieve methode van Brandenberg-Roberts-Stolnikov en nefelometrie (590-650 nm) na reactie met sulfosalicylzuur;
  • in de cerebrospinale vloeistof - nefelometrie (410-480 nm) na reactie met sulfosalicylzuur en natriumsulfaat;
  • in de vloeistof van sereuze holten - nefelometrie (590 - 650 nm) na reactie met sulfosalicylzuur.

Bepaling van totaal eiwit
in bloedserum volgens biuret-methode

beginsel

Eiwitten reageren in een alkalisch milieu met kopersulfaat en vormen paarse chelaatverbindingen. De kleurintensiteit is evenredig met het aantal peptidebindingen.

Methoden voor de bepaling van totaal eiwit in serum

Referentiewaarden van de totale eiwitconcentratie in serum - 65-85 g / l

2. Bepaling van de serum specifieke dichtheid

3. Gewicht (gravimetrisch), waarbij bloedeiwitten worden geprecipiteerd, gedroogd tot constant gewicht en gewogen op een analytische balans.

1. Refractometer IRF - 454 B2M

ontworpen om het eiwit in serum, hersenvocht te bepalen, de concentratie van geneesmiddelen te controleren, de dichtheid van urine te meten.

2. Cobas integra - Totaal eiwit Gen.2

Testprincipe: tweewaardig koper reageert in een alkalische oplossing met eiwitpeptide-bindingen om het karakteristieke purper gekleurde biureetcomplex te vormen.

3. Bepaling van eiwitfracties van bloedserum door celluloseacetaatfilmelektroforese.

De bufferoplossing is ontworpen voor elektroforetische scheiding van serumeiwitten op celluloseacetaatmembranen gevolgd door densitometrische bepaling van eiwitfracties.

PRINCIPE VAN DE METHODE

Het principe van elektroforetische scheiding van eiwitten is gebaseerd op verschillende snelheden van beweging van serumeiwitmoleculen in een constant elektrisch veld van een bepaalde intensiteit. Gescheiden eiwitfracties worden gekleurd met een kleurstof. De intensiteit van de kleur van de eiwitfracties is evenredig met hun aantal.

ANALYSERENDE MONSTERS

Bloedserum, vrij van hemolyse, lipemie en niet-icterisch. De serumproteïnefracties zijn stabiel in een goed gesloten buis bij 18-25 gedurende 8 uur, bij 2-8 gedurende 3 dagen, bij 20 gedurende 1 maand.

ANALYSE GEDRAG

1. Voer elektroforese uit

1.1. droge membranen moeten voorzichtig op het oppervlak van de buffer worden geplaatst voor elektroforese, om te voorkomen dat ze snel onderdompelen en weerstaan ​​tot ze volledig bevochtigd zijn. Natte membranen verwijderen voorzichtig tussen vellen dik filtreerpapier en voorkomen dat ze uitdrogen. Voordat de monsters worden aangebracht, is het wenselijk om de pre-phoresis-fase uit te voeren Plaats hiervoor het membraan in een kamer voor elektroforese en schakel de stroom gedurende 10 minuten in de geselecteerde modus in. De pre-phoresis-fase kan worden vervangen door langdurig weken van het membraan in de bufferoplossing (enkele uren).

1.2. gebruik de applicator en breng de geanalyseerde serummonsters aan op een afstand van 2-3 cm van de kathoderand van het membraan. Plaats het membraan in een elektroforetische kamer en sluit de stroom aan.

2. Elektroforegamverwerking

2.1. kleurstof crimson S.

Na het uitschakelen van de stroom, het membraan voorzichtig overbrengen naar de kleurstofoplossing gedurende 3-5 minuten, vervolgens twee keer gedurende 3 minuten in 5-7% oplossing van azijnzuur (tot achtergrond bleken).

1.2. proces elektroforegram met behulp van een scanner en een computerprogramma.

4. Thymol-test

Serum beta-globulines, gamma-globulines en lipoproteïnen precipiteren bij pH 7,55 met thymol-reagens. Afhankelijk van de hoeveelheid en de onderlinge verhouding van eiwitfracties, ontstaat troebelheid tijdens de reactie, waarvan de intensiteit turbidimetrisch wordt gemeten.

Thymol-test is meer geschikt voor de functionele studie van de lever dan colloïd-resistente monsters. Er wordt aangenomen dat het positief is in 90-100% van de gevallen van de ziekte van Botkin (al in de pre-arytische fase en in de anicterische vorm) en in toxische hepatitis. De reactie is positief in het geval van post-hepatitis en post-necrotische, vooral icterische cirrose (in tegenstelling tot andere vormen van cirrose), collageenziekten, malaria en virale infecties. Bij obstructieve geelzucht is het (in 75% van de gevallen) negatief, wat een differentiële diagnostische waarde heeft.

Met obstructieve geelzucht wordt het monster alleen positief als het proces gecompliceerd wordt door parenchymale hepatitis. Voor de differentiatie van obstructieve geelzucht uit parenchymale cellen is het gebruik van de thymol-test met de Burstein-test (voor bèta- en pre-ethylipoproteïnen) van groot belang.

Bij parenchymale geelzucht zijn beide monsters positief, met mechanische geelzucht, de thymol-test is negatief, de Burstein-test is sterk positief.

Totaal eiwit, de waarde ervan en bepalingsmethoden (pagina 1 van 2)

MUZIEK "EERSTE STAD KLINISCH ZIEKENHUIS NOODGEVALLEN MEDISCHE HULP"

NOORD-STAAT MEDISCHE UNIVERSITEIT

KLINISCH LABORATORIUM DIAGNOSTISCHE CURSUS

Totaal eiwit, de waarde ervan en bepalingsmethoden

Arkhangelsk 2008

Bloedplasma-eiwitten

Methoden voor de bepaling van totaal eiwit in serum

Referenties

Eiwitten zijn hoogmoleculaire organische stikstofhoudende verbindingen die bestaan ​​uit meer dan 20 soorten alfaminozuren. Voorwaardelijke grens tussen grote polypeptiden en eiwitten is het molecuulgewicht van 8000-10000. Plasma-eiwitten worden voornamelijk gesynthetiseerd in de lever, plasmacellen, lymfeknopen, milt en beenmerg.

Menselijk bloedplasma bevat meer dan 100 verschillende eiwitten, waarvan de oorsprong en functie verschillen. Van 9-10% van het droge residu van bloedplasma zijn 6,5-8,5% eiwitten.

· Eenvoudig (eiwitten) (bevatten alleen aminozuren)

· Complex (proteïden) (aminozuren en niet-aminozuurcomponenten: heem, vitaminederivaten, lipiden of koolhydraten)

· Fibrillair (dat veel dichte weefsels vormt)

· Bolvormig (albumine (4-5%), globulinen (2-3%), fibrinogeen (0,2-0,4%)

De volgende functionele klassen van eiwitten bestaan:

- transporteiwitten (transferrine)

- Eiwitten van de acute fase (C-reactief proteïne)

- Eiwitten van de niet-acute fase (albumine, transferrine)

- Complementaire en stollingsfactoren (complement C4, factor VIII)

- Antiferment (antitrombine III)

- Eiwitten waarvan de functies niet goed worden begrepen (alfa-glycoproteïnezuur)

De fysiologische functie van plasma-eiwitten is het handhaven van de colloïde osmotische druk, de buffercapaciteit van het plasma, in sommige gevallen - depositie (opslag) van lipidemoleculen, metabolische producten, hormonen, medicinale stoffen en micro-elementen. Sommige plasma-eiwitten voeren een enzymatische functie uit, immunoglobulinen voeren humorale immuniteit uit. Complementcomponenten en C-reactief proteïne zijn belangrijk voor de implementatie van niet-specifieke resistentie, in het bijzonder in het geval van bacteriële infecties. De balans tussen factoren en remmers van coagulatie verschaft een vloeibare toestand van bloed in de normale toestand en snelle stolling in het geval van een verwonding.

Bloedplasma-eiwitten

De genormaliseerde waarde is 56,5 - 66,8 (albumine in serum is goed voor ongeveer 60% van het totale eiwit Albumine wordt gesynthetiseerd in de lever (ongeveer 15 g / dag), hun halfwaardetijd is ongeveer 17 dagen De oncotische druk van plasma is 65-80% door albumine. transporteren belangrijke functie van vele biologisch actieve stoffen, in het bijzonder hormonen. Zij zijn in staat te binden aan cholesterol, bilirubine. veel van calcium in het bloed wordt ook geassocieerd met albumine. albumine kunnen binden met verschillende geneesmiddelen.

Zowel kwalitatieve als kwantitatieve veranderingen in plasma-albumine zijn mogelijk. De kwalitatieve veranderingen van albumine zijn zeer zeldzaam vanwege de homogene samenstelling van deze eiwitfractie; kwantitatieve veranderingen manifesteren zich door hyper- en hypoalbuminemie.

Hyperalbuminemie waargenomen met uitdroging in gevallen van ernstig letsel, met uitgebreide brandwonden, cholera.

Hypoalbuminemie is primair (bij pasgeborenen als gevolg van onvolledigheid van de levercel) en secundair vanwege verschillende pathologische aandoeningen die lijken op die welke hypoproteïnemie veroorzaken. Bij een daling van de albumineconcentratie kan hemodilutie ook een rol spelen, bijvoorbeeld tijdens de zwangerschap. De afname van albumine-gehalte onder 22-24 g / l gaat gepaard met de ontwikkeling van longoedeem.)

· Alfa 1 - 3,5 - 6,0 (de hoofdcomponenten van deze breuk omvatten α1 - Antitrypsine, α1 - lipoproteïne, zuur α1 - glycoproteïne) (verandering in fractie α1 - Globulines worden waargenomen bij acute, subacute, exacerbatie van chronische ontstekingsprocessen; leverschade; alle processen van weefselverval of celproliferatie. Verlaag α-fractie1 - globulines worden waargenomen bij een tekort α1 - antitrypsine, hypo - α1 - lipoproteïnemie.)

· Alfa 2 - 6.9 - 10.5 (fractie bevat α2 - macroglobuline, haptoglobine, alipoproteïnen A, B (apo-A, apo-B), C, ceruloplasmine) (toename in fractie α2 - globulines worden waargenomen bij alle soorten acute inflammatoire processen, vooral met een uitgesproken exsudatief en etterig karakter (longontsteking, empyeem, andere vormen van etterende processen); ziekten geassocieerd met de betrokkenheid bij het pathologische proces van bindweefsel (collagenose, auto-immuunziekten, reumatische ziekten); kwaadaardige tumoren; in herstelfase na thermische brandwonden; nefrotisch syndroom; hemolyse van bloed in vitro. Een afname van de fractie wordt waargenomen bij diabetes mellitus, pancreatitis (soms), aangeboren geelzucht van mechanische oorsprong bij pasgeborenen en toxische hepatitis. K α2 - Globulines omvatten het grootste deel van de eiwitten van de acute fase. De toename van het gehalte weerspiegelt de intensiteit van de stressrespons en ontstekingsprocessen in dit soort pathologie.

· Beta - 7,3-13,0 (β-fractie die transferrine, Hemopexine, complement componenten, immunoglobuline en lipoproteïnen) (vergroting beta globuline fracties werd gedetecteerd door de primaire en secundaire hyperlipoproteinemie, leverziekte, nefrotisch syndroom, bloedende maagzweer, hypothyroïdie verlagen de waarde inhoud. beta-globulines worden gedetecteerd in gopo-bèta-lipoproteïnemie.

· Gamma - 12.8 - 19.0 (γ-fractie bevat Ig (IgG, IgA, IgM IgD, IgE), daarom wordt een toename van het gehalte aan γ-globulines opgemerkt tijdens de reactie van het immuunsysteem, wanneer AT en auto-antilichamen worden geproduceerd: bij virale en bacteriële infecties, ontsteking, collageenvorming, weefselvernietiging en brandwonden Significante hypergammaglobulinemie, die de activiteit van het ontstekingsproces weerspiegelt, is kenmerkend voor chronische actieve hepatitis en levercirrose Verhoogde γ-globulinefractie wordt waargenomen bij 88-92% van de patiënten met chronische actieve hepatitis (en bij 60-65% van de patiënten is het uitgesproken - tot 26 g / l en hoger.) Bijna dezelfde veranderingen worden opgemerkt bij patiënten met zeer actieve en ver doorgevoerde cirrose van de lever, terwijl vaak het gehalte aan γ-globuline het gehalte aan albumine overschrijdt, wat als een slecht prognostisch teken wordt beschouwd.

Bij bepaalde ziekten is verhoogde eiwitsynthese mogelijk, die in de γ-globulinefractie valt, en pathologische eiwitten verschijnen in de bloedparaproteïnen, die tijdens elektroforese worden gedetecteerd. Om de aard van deze veranderingen te verduidelijken, is immuno-elektroforese vereist. Vergelijkbare veranderingen worden opgemerkt bij myeloom, de ziekte van Waldenström.

Verhoogde bloedspiegels van y-globulines worden ook waargenomen bij reumatoïde artritis, SLE, chronische lymfocytische leukemie, endothelioom, osteosarcoom en candidiasis.

De afname van het gehalte aan γ-globuline is primair en secundair.

Er zijn drie hoofdtypen primaire hypogammaglobulinemie: fysiologisch (bij kinderen van 3-5 maanden), aangeboren en idiopathisch. De oorzaken van secundaire hypogammaglobulinemie kunnen zijn tal van ziekten en aandoeningen die leiden tot uitputting van het immuunsysteem.

Vergelijking van de richting van veranderingen in het gehalte van albumine en globulines met veranderingen in het totale eiwitgehalte geeft gronden voor de conclusie dat hyperproteïnemie vaker wordt geassocieerd met hyperglobulinemie, terwijl hypoproteïnemie meestal wordt veroorzaakt door hypoalbuminemie. In het verleden werd de berekening van de albumine-globuline-coëfficiënt, dat wil zeggen de verhouding van de albuminefractie tot de globulinefractie, op grote schaal gebruikt. Normaal gesproken is dit 2,5-3,5. Bij patiënten met chronische hepatitis en cirrose van de lever neemt deze coëfficiënt af tot 1,5 en zelfs tot 1 door een afname van albumine en een toename van de fractie globulines. De laatste jaren wordt meer en meer aandacht besteed aan het bepalen van het gehalte aan prealbumine, vooral bij patiënten met ernstige reanimatie die parenterale voeding gebruiken. Vermindering van de concentratie van prealbumine - een vroege en gevoelige test van eiwitgebrek in het lichaam van de patiënt.)

De coëfficiënt A / G wordt meestal gebruikt als index voor de verhouding tussen albumine en globuline.

Veranderingen in deze ratio kunnen worden waargenomen bij levercirrose, glomerulonefritis, nefrotisch syndroom, acute hepatitis en systemische lupus erythematosus.

De concentratie van eiwitten in het bloedplasma is afhankelijk van de verhouding tussen de snelheid van hun synthese en eliminatie van het lichaam, evenals het distributievolume.

Veel eiwitten worden in de lever gevormd, plasmacellen en lymfocyten synthetiseren immunoglobulines, macrofagen - eiwitten van het complementsysteem. Passief verlies van eiwitten met laag molecuulgewicht vindt plaats door de glomeruli en de darmwand. Sommige van deze eiwitten ondergaan reabsorptie of worden gevangen en gespleten in het darmslijmvlies. De meeste van de plasma-eiwitten na hun vangst door pinocytose worden gekataboliseerd in de capillaire endotheelcellen of mononucleaire fagocyten.

De fysiologische rollen van bloedeiwitten zijn talrijk, de belangrijkste zijn de volgende:

· Behoud colloïde-oncotische druk, behoud van het volume van het bloed, het water vastmaken en vasthouden, niet toestaan ​​dat het de bloedbaan verlaat;

· Neem deel aan bloedstollingsprocessen;

· Constante bewaring van de pH van het bloed, vorming van een van de bloedbuffersystemen;

· Verbinden met een aantal stoffen (cholesterol, bilirubine, etc.), evenals medicijnen, deze afleveren aan de weefsels.

· Behoud een normaal niveau van kationen in het bloed door niet-gedialyseerde verbindingen ermee te vormen (bijvoorbeeld 40-50% serumcalcium is geassocieerd met eiwitten, een aanzienlijk deel van ijzer, koper, magnesium en andere sporenelementen is ook geassocieerd met eiwitten);

4. Bepaling van totaal serumeiwit door biureetreactie

Bepaling van totaal eiwit door biureetreactie is verreweg het meest gebruikelijk. methode voor het bepalen van totaal serumeiwit. De methode is relatief goedkoop, eenvoudig, heeft goede reproduceerbaarheid en specificiteit, het gebruik ervan stelt u in staat om onderzoek uit te voeren op analysatoren (automatisch en halfautomatisch) en op een conventionele fotometer.

Eiwitten reageren in een alkalisch milieu met kopersulfaat om complexe verbindingen te vormen die paars gekleurd zijn. Afhankelijk van de intensiteit van de kleuring, die evenredig is met de hoeveelheid eiwit, bepaal het gehalte ervan in het serum.

Om te bepalen totaal bloedproteïne voor de biureetreactie is bloed wenselijk om 's morgens op een lege maag in te nemen.

Natriumchloride, hoofdstuk D. En. of x. uren, 154 mmol / l (isotone oplossing): 9 g natriumchloride wordt in een maatkolf geplaatst met een capaciteit van 1 l, opgelost in water en op het merkteken gebracht met water.

Natronloog, hoofdstuk D.A. of x. uren, 0,2 mol / l: 8 g natriumhydroxide, geplaatst in een maatkolf met een inhoud van 1 liter, zorgvuldig opgelost in water en op het merkteken gebracht met water.

Kaliumjodide, ch.d. en. of x. uur, 30 mmol / l oplossing van kaliumjodide in 0,2 mol / l natriumhydroxideoplossing: 0,5 g kaliumjodide wordt in een maatkolf geplaatst met een capaciteit van 100 ml, ingesteld met 0,2 mol / l natriumhydroxideoplossing tot het merk en opgelost. Het reagens is gedurende 2 weken stabiel wanneer het in een donkere glazen container wordt bewaard.

Kalium-natriumtartraat 4-water (Rochelle-zout) h. A.

Kopersulfaat 5-water ch. A. of x. h.

Biuret-reagens: 4,5 g segnevaatzout wordt opgelost in 40 ml 0,2 mol / l natriumhydroxide, 1,5 g kopersulfaat en 0,5 g kaliumjodide worden toegevoegd en opgelost. Voeg toe aan 100 ml natriumhydroxideoplossing 0,2 mol / l Het reagens is stabiel wanneer het niet langer dan een maand in een houder van donker glas wordt bewaard.

Werkoplossing van biureetreagens: 20 ml biureetreagens wordt gemengd met 80 ml 0,5% oplossing van kaliumjodide. Het reagens wordt niet langer dan twee weken op een donkere plaats bewaard.

Albumine-ijkoplossing (van humaan of runderserum) - 100 g / l albumineoplossing in 154 mmol / l natriumchlorideoplossing: 1 g albumine uit menselijk of runderserum wordt opgelost in 6-7 ml 0,9% natriumchlorideoplossing en isotoon gemaakt natriumchloride-oplossing tot een volume van 10 ml; 1 ml standaardoplossing bevat 0,1 g eiwit.

Studiemateriaal

Zowel serum als plasma kunnen voor analyse worden gebruikt. Vergelijkende resultaten worden meestal verkregen, hoewel, vanwege de aanwezigheid van fibrinogeen, het niveau van totaal eiwit in plasma 2-4 g / l hoger is dan in serum.

Bepaling van het eiwitgehalte in serum verkregen in vacuümsystemen met en zonder scheidingsgel geeft vergelijkbare resultaten. Er waren geen significante verschillen in het eiwitgehalte van bloedmonsters verzameld in glazen of plastic vacuümsystemen.

Voor het onderzoek mag geen gehemoliseerd serum worden gebruikt, aangezien hemoglobine ook een eiwit is en een biureetreactie zal ingaan, wat tot een onjuiste overschatting van de resultaten van de analyse zal leiden: de aanwezigheid van hemoglobine leidt tot een overschatting van de resultaten met 3% voor elke 1 g / l vrij serumhemoglobine.

Het is ongewenst om chyleerserum te gebruiken, omdat het optisch interfereert met de resultaten van troebelheid als gevolg van troebelheid en dientengevolge leidt tot valse overschatting van de resultaten. Extractie met diethylether wordt gebruikt om de interferentie veroorzaakt door significante lipemie te elimineren. Met een lichte aanwezigheid van lipiden kunt u een onderzoek uitvoeren door een "blanco" in het monster van de patiënt op te stellen, of het monster te verdunnen met een isotone natriumchlorideoplossing, en het resultaat vervolgens vermenigvuldigen met de verdunningsgraad.

Bilirubine heeft ook een storend effect bij een concentratie van meer dan 85 μmol / L. Daarom wordt in het geval van hyperbilirubinemie ook een serumverdunning of een "blanco" -installatie volgens het monster van de patiënt gebruikt.

In sommige gevallen kunnen de geneesmiddelen die worden gebruikt om de reactie te beïnvloeden, met name bij zware patiënten, interfereren. Dextranen die worden gebruikt als oplossingen voor het substitueren van plasma vormen bijvoorbeeld een complex met koper en tartraat in het reactiemengsel en leiden tot de vorming van een bros blauw neerslag. De mate van interferentie hangt af van de concentratie van dextran en de samenstelling van het biureetreagens. Met de gebruikelijke hoeveelheden dextran kan de grootte van de fout van 3 tot 50% zijn. Er wordt aangenomen dat de toevoeging van glycerol aan het reagens of het gebruik van een lage concentratie NaOH kan voorkomen dat dextran de reactie stoort. De aanwezigheid in het monster van ammoniumionen kan bijdragen aan de vorming van ammoniumcomplexen met koperionen, leiden tot een afname van de concentratie van koperionen in het reactiemedium, en dienovereenkomstig tot een afname van de reactiesnelheid en vals-negatieve resultaten. In zeldzame gevallen is de tussenkomst van geneesmiddelen in het serum zodanig dat de interactie van biureetreagens met serum wordt waargenomen of de ontwikkeling van kleur, anders dan violet, of het optreden van troebelheid. Schat de hoeveelheid eiwit in dit serum is onmogelijk.

Het totale eiwitgehalte is stabiel in serum en plasma gedurende 1 week bij kamertemperatuur en ten minste 2 maanden bij -20 ° C.

Het verloop van de bepaling van totaal eiwit in serum door biureetreactie

Experimentele test: voeg aan 0,1 ml serum 5 ml van de werkoplossing van biuret-reagens toe en meng, waarbij de vorming van schuim wordt vermeden. Na 30 minuten (en niet later dan een uur) worden ze gemeten op een fotometer in een cuvette met een laagdikte van 1 cm bij een golflengte van 500-560 nm (groen filter) tegen een blanco monster.

Blanco: aan 5 ml biureetreagens toegevoegd 0,1 ml 154 mmol / l natriumchloride-oplossing, daarna behandeld als een experimenteel monster.

De berekening wordt uitgevoerd volgens het kalibratieschema.

Constructie van de kalibratiegrafiek: werkoplossingen worden bereid uit de kalibratie-oplossing zoals hieronder aangegeven.

Methoden voor de bepaling van totaal eiwit in serum

Serum-eiwitten zijn een heterogene groep van eiwitten, waaronder transporteiwitten, enzymen, immunoglobulinen, hormonen, remmende eiwitten en vele andere. Ondanks de verschillen in samenstelling, structuur, fysische en chemische eigenschappen en de uitgevoerde functie, hebben weiproteïnen een aantal gemeenschappelijke kenmerken:

  1. bevatten koolstofatomen, waterstof, zuurstof, stikstof;
  2. bestaat uit aminozuren gekoppeld door peptidebindingen;
  3. bezitten absorptie in het ultraviolette gebied van het spectrum;
  4. gedragen zich vergelijkbaar in een reeks van chemische reacties.

Op basis van deze gemeenschappelijke eigenschappen werden methoden voor het bepalen van eiwit in biologische vloeistoffen ontwikkeld.

Methoden voor het bepalen van totaal eiwit

Onder de methoden voor het bepalen van de concentratie van totaal eiwit kan worden verdeeld in verschillende hoofdgroepen op basis van verschillende principes:

  • stikstof isometrics;
  • gravimetrisch (gewicht);
  • "Pretsipitatsionnye";
  • spectrofotometrie;
  • refractometrisch;
  • colorimetrische.

Naast de hierboven genoemde, zijn ook andere methoden ontwikkeld, zoals fluorimetrische, polarimetrische, evenals atomaire absorptiespectrofotometrie en eiwitaminozuuranalysemethoden.

Nitometrische methoden

Azotometrische methoden voor het bepalen van totaal wei-eiwit zijn gebaseerd op het bepalen van de hoeveelheid eiwitstikstof die wordt geproduceerd door de afbraak van aminozuren die eiwitten vormen. De methode werd voor het eerst voorgesteld door Kjeldahl in 1883. In de Kjeldahl-methode, die momenteel van algemeen historisch belang is, wordt stikstof in eiwitten geoxideerd tot ammoniumion en de hoeveelheid ervan wordt bepaald door titratie met een exacte oplossing van zoutzuur. Bovendien kan het ammoniumion worden bepaald door Nessler's reagens, door de manometrische methode na de omzetting van ammoniumion in moleculaire stikstof door de werking van hypobromiet of door gebruik te maken van de optische test van Warburg met de deelname van het enzym glutamaatdehydrogenase. Op basis van het feit dat eiwitten uit biologische objecten gemiddeld 16% stikstof bevatten, wordt de hoeveelheid stikstof die wordt verkregen als resultaat van de analyse vermenigvuldigd met een factor van 6,25. In het verleden is factor 6.25 gebruikt, hoewel de waarde ervan afhangt van de eiwitsamenstelling van het onderzochte monster. Voor individuele eiwitfracties in serum of plasma varieert de factorgrootte van 5,69 tot 6,52.

Het nadeel van de isometrische werkwijzen is de lengte en complexiteit van de procedure, zelfs al kan de ammoniak geproduceerd in de reactie worden bepaald door de enzymatische methode. Met automatisering kunt u deze methode in sommige gevallen gebruiken als vergelijkingsmethode vanwege de voldoende nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid.

Gravimetrische methoden

Gravimetrische (gewichts-) methoden voor het bepalen van totaal wei-eiwit zijn gebaseerd op drogende eiwitten tot constant gewicht en wegen op een analytische balans. De werkwijzen zijn omslachtig en worden praktisch niet gebruikt om totaal wei-eiwit te bepalen. De gravimetrische methode wordt nog steeds in sommige laboratoria gebruikt om fibrinogeen in het bloedplasma te bepalen.

"Neerslag" methoden

"Precipitatie" werkwijzen voor het bepalen van totaal eiwit zijn gebaseerd op het verminderen van de oplosbaarheid van eiwitten en het vormen van een suspensie van gesuspendeerde deeltjes onder invloed van verschillende middelen. Het eiwitgehalte in het testmonster wordt beoordeeld hetzij door de intensiteit van lichtverstrooiing (nefelometrische analysemethode), bepaald door het aantal lichtverstrooiende deeltjes, of door de verzwakking van de lichtstroom door de resulterende suspensie (turbidimetrische analysemethode).

De resultaten van deze groep van werkwijzen zijn afhankelijk van vele factoren: de snelheid van mengen van de reagentia, de temperatuur van het reactiemengsel, de pH van het medium, de aanwezigheid van vreemde verbindingen, fotometriewerkwijzen. Zorgvuldige hechting aan de reactieomstandigheden bevordert de vorming van een stabiele suspensie met een constante deeltjesgrootte en reproduceerbare resultaten. "Precipitatie" -werkwijzen voor het bepalen van serumeiwit zijn niet herkend en hebben toepassing gevonden bij de bepaling van eiwit in urine, hersenvocht en veel individuele eiwitten met behulp van specifieke antilichamen.

Spectrofotometrische methoden

Spectrofotometrische methoden voor het bepalen van totaal serumeiwit zijn gebaseerd op het meten van de absorptie van licht in het ultraviolette gebied.

Eiwitoplossingen hebben een absorptie bij 270-290 en 200-225 nm. Absorptie bij 270-290 nm wordt bepaald door de aanwezigheid van aromatische aminozuren - tyrosine, tryptofaan en fenylalanine - in het eiwitmolecuul. Absorptie bij 200-225 nm is bijna 20 keer hoger dan bij 280 nm en is voornamelijk te wijten aan peptidebindingen.

De nauwkeurigheid en specificiteit van methoden voor het bepalen van eiwit, gebaseerd op absorptie bij 270-290 nm, is klein, omdat het gehalte aan tyrosine en tryptofaan in verschillende serumeiwitten kan variëren. Bovendien introduceert de aanwezigheid van vrije aminozuren in serum-tyrosine en tryptofaan, urinezuur en bilirubine, absorberend bij 280 nm, een zekere fout. In dit opzicht wordt deze methode niet gebruikt om direct het gehalte aan totaal eiwit in serum te bepalen.

Integendeel, de absorptie in het ultraviolette gebied - 200 - 225 nm is hoofdzakelijk te wijten aan peptidebindingen en daarom verschilt de hoeveelheid absorptie van verschillende serumeiwitten enigszins. In dit spectrale bereik wordt de wet van Beer waargenomen bij een serumeiwitconcentratie tot 120 g / l.

Bepaling van totaal serumeiwit met behulp van directe fotometrie bij 210 nm levert resultaten op die vergelijkbaar zijn met de biureetmethode en de Kjeldahl-methode. Tegelijkertijd wordt deze methode praktisch niet gebruikt vanwege de noodzaak om een ​​cuvette te gebruiken die niet absorbeert bij 210 nm en een monochromator, wat de kosten van de methode verhoogt.

Refractometrische methoden

Refractometrische methoden voor het bepalen van totaal wei-eiwit zijn gebaseerd op het vermogen van eiwitoplossingen om de lichtstroom te breken. Bij een temperatuur van 17,5 ° C is de brekingsindex van water 1,3332, bij dezelfde temperatuur varieert de brekingsindex van serum tussen 1,34980-1,3505. Vanwege het feit dat de concentratie van elektrolyten en niet-eiwitorganische verbindingen die het brekingsvermogen beïnvloeden klein en tamelijk constant is in het serum van een gezond persoon, hangt de waarde van de brekingsindex van bloedserum in de eerste plaats af van het gehalte aan eiwitten daarin. Het instrument is gekalibreerd met serum met een bekende eiwitconcentratie. Eenvoud maakt refractometrie een geschikte methode voor het bepalen van het gehalte aan totaal eiwit in het bloedserum, hoewel bij een aantal ziekten, in het bijzonder bij diabetes mellitus, chronisch nierfalen, het gebruik ervan kan leiden tot een significante fout.

Colorimetrische (fotometrische) methoden

Colorimetrische methoden voor het bepalen van totaal eiwit zijn gebaseerd op kleurreacties van eiwitten met chromogeenvormende reagentia of op niet-specifieke binding van de kleurstof.

Van de colorimetrische methoden voor het bepalen van de concentratie van totaal serumeiwit, is de meest gebruikelijke de biureetwerkwijze gebaseerd op de zogenaamde "color biuret reaction", waarbij eiwitten reageren in een alkalisch medium met kopersulfaat om verbindingen te vormen die in violet gekleurd zijn, de kleurintensiteit hangt af van de concentratie van totaal wei-eiwit. De biureetmethode voor het bepalen van het totale serumeiwit werd goedgekeurd als unified in 1972.

Colorimetrische methoden voor het bepalen van totaal serumeiwit zijn tamelijk eenvoudig en relatief goedkoop. Het nadeel van de methode is het storende effect van bepaalde stoffen (waaronder medicijnen).

Andere methoden voor het bepalen van totaal serumeiwit

Fluorimetrische en andere moderne methoden voor het bepalen van totaal eiwit (bijvoorbeeld polarimetrische micromethode of atomaire absorptieanalyse) hebben een hoge gevoeligheid en specificiteit, maar de noodzaak om speciale apparatuur te introduceren, en soms speciale analistkwalificaties, samen met de relatief hoge kosten van bepaling maakt deze methode tot een onderzoeksmiddel. instellingen en beperkt het gebruik ervan in het klinische laboratorium aanzienlijk.

Referenties:

  • Het naslagwerk "Laboratory Research Methods in the Clinic" onder redactie van Menshikov VV - Moskou, "Medicine", 1987
  • AV Kozlov A.V., Slepysheva V.V. - Bepaling van het eiwit in serum.
  • Medische biochemie: laboratoriumworkshop onder redactie van N. Semikolenova A. - Omsk, Omsk State University, 2005

Gerelateerde artikelen

Kwantitatieve methoden voor het bepalen van totaal urine-eiwit

Elk urinemonster is geschikt voor eiwitkwantificatie. De meeste onderzoekers geven er de voorkeur aan om de hoeveelheid eiwit in de verzamelde urine per dag te bepalen om het dagelijkse verlies van eiwit vast te stellen.

Sectie: Urine-analyse

Totaal serumeiwit

Met de term totaalserumproteïne wordt een groot aantal eiwitten bedoeld die in het serum aanwezig zijn en die verschillen qua structuur, fysisch-chemische eigenschappen en functie. Alle serumeiwitten worden verdeeld in albumine en globulines. Naast albumine en globulines bevat bloedplasma ook fibrinogeen, waardoor het gehalte aan totaal eiwit in bloedplasma iets hoger is dan in serum.

Sectie: Klinische biochemie

Bepaling van totaal serumeiwit door biureetreactie

Bepaling van totaal eiwit door de biureetreactie is veruit de meest gebruikelijke methode voor het bepalen van totaal eiwit in bloedserum. De methode is relatief goedkoop, eenvoudig, heeft goede reproduceerbaarheid en specificiteit, het gebruik ervan stelt u in staat om onderzoek uit te voeren op analysatoren (automatisch en halfautomatisch) en op een conventionele fotometer.

Sectie: Klinische biochemie

Eiwit in de urine: methoden om te bepalen

Pathologische proteïnurie is een van de belangrijkste en blijvende tekenen van nier- en urinewegaandoeningen. De bepaling van de urine-eiwitconcentratie is een essentieel en belangrijk element van urinetests.

Sectie: Urine-analyse

Fotometrische methoden voor de bepaling van ureum

Fotometrische methoden voor de bepaling van ureum zijn gebaseerd op de reactie van ureum met verschillende stoffen met de vorming van gekleurde verbindingen. Van de fotometrische methoden voor de bepaling van ureum zijn de meest gebruikelijke methoden op basis van de reactie van ureum met diacetylmonooxime.

Sectie: Klinische biochemie

Lezing: BEPALING VAN DE ALGEMENE EIWIT IN HET BLOEDSERUM

De resultaten van de experimenten Tabel 3.

INHOUD RAPPORTEN VOOR ZELFTESTS

6.1. Welke niveaus van de structurele organisatie van het eiwitmolecuul kent u? Welke verbindingen zijn betrokken bij hun stabilisatie?

6.2. Wat is eiwitdenaturatie? Welke niveaus van structurele organisatie worden vernietigd?

6.3. Welke denaturerende middelen kent u? Welke bindingen in een eiwitmolecuul vernietigen ze voornamelijk?

6.4. Waar hangt eiwit oplosbaarheid van af? Welke factoren stabiliseren eiwit in oplossing?

6.5. Wat wordt bedoeld met reversibele en irreversibele eiwitneerslag? Welke eiwitafzettingsreacties zijn omkeerbaar? Welke neerslagen van proteïneprecipitaties zijn onomkeerbaar?

6.6. Wat veroorzaakt irreversibele proteïneprecipitatiereacties? Hun toepassing in de medische praktijk.

6.7. Zal proteïne uit oplossing in de aanwezigheid van een overmaat van zuur of alkali coaguleren? Waarom?

6.8. Zal de precipitatie van eiwit plaatsvinden onder de actie van: 1) lage concentraties natriumchloride-oplossing; 2) hoge concentraties natriumchloride-oplossing; 3) lage concentraties kwikchloride-oplossing?

6.9. Wat is eiwitten verzuren? Met welk doel wordt zouten gebruikt in de geneeskunde?

6.10. Wat veroorzaakte de lading van een eiwitmolecuul in een oplossing?

6.11. Geef de definitie van het iso-elektrische punt van een eiwit. Hoe kan het eiwit worden bepaald?

6.12. Bepaal de bewegingsrichting van het eiwit met pI = 4,6 wanneer gefractioneerd door elektroforese in een bufferoplossing met pH = 8,2.

BEPALING VAN ALGEMENE EIWIT IN BLOEDSERUM

DOELWERK TAAK - THEORETISCH DEEL

Het gehalte aan totaal eiwit in het serum (plasma) van bloed kan worden gekarakteriseerd door de concepten van normo, hypo en hyperproteïnemie, wat voorwaarden betekent die gepaard gaan met normale (niet verder dan fysiologische fluctuaties), lage of hoge concentratie. Het normale totale serumproteïnegehalte is: bij volwassenen - 65-85 g / l, bij pasgeborenen - 46-60 g / l, bij kinderen jonger dan 2 jaar - 51-75 g / l, ouder dan 2 jaar - 60-85 g / l.

Veranderingen in het niveau van het totale eiwit kunnen zowel absoluut als relatief zijn. De laatste zijn meestal gemarkeerd met een toename (afname) van het bloedvolume. Aldus polyplasmia ( "water" vergiftiging), overvloedige infusie van glucose-oplossing en andere fysiologische vloeistoffen, anurie, hypersecretie van antidiuretisch hormoon aldosteron en dat retentie van water in het lichaam leiden tot de ontwikkeling relatieve hypoproteïnemie; door dehydratie (uitdroging) te wijten aan vochtverlies tijdens anacatharsis, hevige diarree, cholera, diabetes insipidus, zweten (koorts), polyurie gedetecteerd relatieve hyperproteinemia.

In de meeste inwendige ziekten gekenmerkt door veranderingen in het metabolisme van eiwitten, gedetecteerd hypoproteïnemie dragen gewoonlijk secundaire verworven aard (primaire hypoproteinemia relatief zeldzaam, wordt genetisch bepaald en voortvloeit uit gendefecten codeert bepaalde serumeiwitten, zoals - analbumineniya, agammaglobulinemie, etc. )..

Absolute hypoproteïnemie wordt gedetecteerd in pathologische omstandigheden waarbij er sprake is van een afname in biosynthese, verhoogd katabolisme of een toename van eiwitverlies. De meest voorkomende oorzaken zijn:

1. Onvoldoende inname van eiwit, gewoonlijk worden waargenomen bij ondervoeding, honger, tumoren, vernauwing van de slokdarm, aandoeningen van het maagdarmkanaal functie (als gevolg van afbraak van eiwit vertering en absorptie van voedingsingrediënten), als aanhoudend ontstekingen in de darmen. Volgens A.A. Pokrovsky, zelfs een ongebalanceerde aminozuursamenstelling van voedsel kan soms leiden tot hypoproteïnemie.

2. Onderdrukking van de proteosynthetische functie van de lever, waargenomen bij parenchymale hepatitis, evenals intoxicaties veroorzaakt door lange etterende processen, kwaadaardige tumoren, de werking van sommige chemische giffen. De getroffen levercellen, waar de plaats van vorming van albumine, fibrinogeen en globulinen deel zijn, niet plasmaproteïnen synthetiseren voldoende hoeveelheden zodat de ontwikkeling hypoproteïnemie voornamelijk hypoalbuminemie en hypofibrinogenemie.

3. Verhoogde eiwitafbraak in het lichaam, veroorzaakt door de behoefte aan vergoeding van hoge energiekosten in verband met het gebrek aan plastic middelen (brandwondziekte, kwaadaardige gezwellen, hyperthyreoïdie, hypercorticisme, enz.).

4. Verlies van eiwit in het lichaam met bloed bij acute en chronische bloedingen, met urine in nefrotisch syndroom, door beschadigd darmslijmvlies (enteropathie) en huid (psoriasis, uitgebreide brandwonden, enz.).

Een verlaagd eiwitgehalte in het bloedplasma wordt ook waargenomen in bepaalde fysiologische omstandigheden, bijvoorbeeld bij vrouwen in de laatste maanden van de zwangerschap en tijdens borstvoeding.

Opgemerkt moet worden dat, om normale processen van vitale activiteit te waarborgen, het organisme tijdens hypoproteïnemie primair de albuminefractie van plasma-eiwitten gebruikt. Bij verhoogde consumptie van albumine, die voornamelijk oncotische druk van het bloed veroorzaakt, ontwikkelen zich oedemen, die worden waargenomen bij pathologische aandoeningen, vergezeld van een afname van het eiwitgehalte in het bloedplasma onder 50 g / l. Het is ook bekend dat de helft van het calcium in plasma aan albumine is gebonden. Daarom gaat hypoalbuminemie bijna altijd gepaard met hypocalciëmie. Wanneer dit gebeurt, neemt alleen de eiwitgebonden (fysiologisch inactieve) fractie van calcium af, wat niet leidt tot de ontwikkeling van tetanie en toevallen. Een van de belangrijke functies van albumine is het binden en transporteren van bilirubine, vrije vetzuren en veel geneesmiddelen (bijvoorbeeld salicylaten, penicilline en sulfonamiden). Geneesmiddelen die met albumine zijn geassocieerd, zijn niet fysiologisch en farmacologisch actief. Een significante afname van plasma-albumine, leidend tot een afname van de bindingscapaciteit, kan het gehalte aan vrije fracties van de bovengenoemde stoffen verhogen, wat kan resulteren in toxische effecten bij gebruikelijke doseringen van geneesmiddelen.

Absolute hyperproteïnemie is een relatief zeldzaam verschijnsel. Typisch wordt gain globuline biosynthese in cellulaire systemen fagocytische mononucleaire cellen (als gevolg van hun infectieuze of toxische stimulatie) met lang bestaande chronische ontstekingsprocessen. Dit wordt met name waargenomen bij chronische polyartritis, cirrose van de lever en sommige chronische processen.

Significante en aanhoudende hyperproteïnemie - tot 120 g / l en hoger wordt geregistreerd bij multipel myeloom (plasmacytoma), Waldenstrem macroglobulinemia, wat resulteert in extra vorming van "abnormale" of pathologische eiwitten - paraproteïnen - in platte botten van de schedel. Daarom, als een patiënt een hoog gehalte aan totaal eiwit in het bloedplasma heeft, moet het verder worden onderzocht op de identificatie van deze vormen van abnormale eiwitten.

Detectie van abnormale eiwitten in het serum (paraproteïnemie) wordt meestal waargenomen bij pathologische aandoeningen, waarvan het ontstaan ​​is gebaseerd op maligne neoplasmen: myelomatose, die verantwoordelijk is voor de meerderheid van de gevallen van maligne paraproteïnemie; B-cel lymfomen, waaronder chronische lymfatische leukemie; ziekten geassocieerd met anomalieën van de zware ketens van immunoglobuline, die een zelden voorkomende groep van ziekten omvatten gekenmerkt door de accumulatie in het bloedplasma of de urine van een abnormaal eiwit geïdentificeerd met het H-ketenfragment. Cryoglobulinemie verwijst naar de paraproteïnemiegroep, waarbij de aanwezigheid van cryoglobulines wordt gedetecteerd in het bloedplasma van patiënten, waaronder eiwitten die precipiteren na afkoeling van bloedplasmamonsters onder de menselijke lichaamstemperatuur. Soms, vooral als de eiwitconcentratie hoog is, kan intravasculaire precipitatie huidlaesies veroorzaken, zoals purpura of het fenomeen van Raynaud.

Uit het bovenstaande volgt dat hypoproteïnemie bijna altijd geassocieerd is met hypoalbuminemie en hyperproteïnemie met hyperglobulinemie.

Bij veel ziekten verandert de procentuele verhouding van individuele eiwitfracties vaak, hoewel de totale hoeveelheid eiwit in het bloedserum binnen het normale bereik blijft. Deze aandoening wordt dysproteïnemie genoemd. Bijvoorbeeld, vanwege een relatief klein molecuulgewicht, treedt het verlies van significante hoeveelheden albumine op onder omstandigheden die worden gekenmerkt door een toename van de permeabiliteit van biologische membranen die bloedplasma scheiden van het extracellulaire fluïdum. Daarom, tijdens de ontstekingsreactie van het lichaam op beschadiging, als gevolg van een toename van de permeabiliteit van de vaatwand, "bleed" albumine in de interstitiële vloeistof, wat leidt tot een afname van de plasmaconcentratie ervan - hypoalbuminemie - optreedt. De plasmafractie snel toe globulinefracties (hoofdzakelijk a-globulinen, die in de samenstelling eiwitten van de acute fase reactanten of g-globuline bevatten) die meestal niet het totale serum eiwitconcentratie veranderen. Tegelijkertijd is er een sterke verandering in de verhouding van verschillende eiwitfracties van bloedplasma.

PROCEDURE VOOR DE WERKPRESTATIES Kwantitatieve bepaling van totaal eiwit in bloedserum volgens de biureetmethode

Momenteel bekende methoden voor kwantitatieve bepaling van serumeiwitten kunnen worden verdeeld in colorimetrisch, op basis van de kleurreacties van eiwitten met bepaalde reagentia; spectrofotometrisch, dat bestaat uit het meten van de mate van absorptie in het ultraviolette gebied en andere. Bij colorimetrische methoden verdienen methoden op basis van de biureetreactie speciale aandacht. Ze zijn zeer nauwkeurig, praktisch beschikbaar en zijn gebaseerd op het vermogen van eiwitten om te reageren in een alkalische omgeving met kopersulfaat, waardoor complexe verbindingen van paarse kleur worden gevormd. Tegelijkertijd zijn verschillen in de intensiteit van de kleuring van de complexen gevormd door albumine en globulines onbeduidend, wat het mogelijk maakt om deze methode te gebruiken om het niveau van bijna alle serumeiwitten te detecteren.

Werk vooruitgang

Aan 5 ml van de werkoplossing van biuret-reagens 0,1 ml serum toevoegen. Na 30 minuten wordt het monster gekleurd op een PEC in een cuvette met een laagdikte van 10 mm met een groen lichtfilter (golflengte 546 nm) tegen de controle, die wordt bereid door toevoeging van 0,1 ml 0,9% NaCl aan 5 ml van de biureet-reagenswerkoplossing. De berekening wordt uitgevoerd volgens de kalibratiecurve.

Constructie van een ijkcurve. Van de 10% standaard eiwitoplossing in een 0,9% NaCl-oplossing worden werkstandaardoplossingen bereid zoals aangegeven in Tabel 10 (0,1 ml van de standaard basisoplossing bevat 0,01 g eiwit). Uit elke verdunning wordt 0,1 ml van de werkoplossing genomen en in buizen gebracht die 5 ml biureetreagens bevatten. Meet na 30-60 minuten het uitdoven van standaardmonsters op FEC versus controle.

Gemiddelde waarden van optische dichtheid, corresponderend met verschillende concentraties, worden toegepast op millimeterpapier. De concentraties van standaard eiwitoplossingen worden afgezet op de abscisas en de overeenkomstige optische dichtheidswaarden worden uitgezet op de ordinaatas. Trek door de behaalde punten een rechte lijn.

Gegevens voor het opstellen van een kalibratiegrafiek voor de kwantitatieve bepaling van de totale eiwitconcentratie in serum zijn weergegeven in tabel 4.

Gegevens om een ​​kalibratiegrafiek te maken Tabel 4